아플라톡신 M1 면역 친화주

아플라톡신(Total Aflatoxins) M1 면역친화주 작동 설명서

[개요]

아플라톡신(Aflatoxin)은 아플라톡신, 기생아플라톡신 등 진균이 만들어내는 이차 대사산물로 세계보건기구(WHO)의 암 연구기관에 의해 1종 발암물질인 동시에 독성*의 맹독물질로 분류돼 각종 음식에 널리 퍼져 있다.옥수수, 땅콩, 쌀, 밀 등 곡물과 그 부산물은 아플라톡신의 주요래원이며 동시에 사료중의 아플라톡신B1이 동물대사를 거친후 산생된 아플라톡신M1은 여전히 아주 강한 독성과 발암성을 갖고있으며 우유, 혈액, 조직 등 식품에도 널리 존재한다.아플라톡신은 간암의 3대 원인 중 하나이자 위암, 장암 등의 주요 원인으로 인간의 건강에 큰 위협이 된다.세계 각국은 식품, 사료 중의 아플라톡신에 대해 모두 엄격한 *를 가지고 있다.2010년 6월 1일부터 시행된 유제품 안전 국가표준에는 유와 유제품에서 아플라톡신 M1의 검출을 규정했는데, 주로 사용되는 시료 전처리 방법이 면역친화주 정화법이다.

【적용 범위 및 성능】

자사 진균독소 면역기둥 제품군 테스트 형태는 HPLC(고효율 액상 크로마토그래피), GC-MS(기상 크로마토그래피-질량 크로마토그래피 연용기), ELISA(효소 연면역 흡착제 측정)를 진행하기 전에 시료를 청소(정화)하거나 농축하도록 설계된 고성능 면역친화기둥이다.

우유, 분유, 발효유, 치즈, 크림 등 샘플 중 아플라톡신 M1의 정성, 정량 검사 및 샘플 전처리에 사용된다.

기둥 용량: ≥ 100ng

회수율: ≥90%

【시험원리】

본 제품의 측정의 기초는 항원 항체 반응이다. 아플라톡신 M1 단클론 항체는 기둥 내 겔에 연결되어 있다. 샘플의 아플라톡신 M1은 추출, 여과, 희석된 후 샘플 추출액을 천천히 아플라톡신 M1 면역친화층 분석주를 통해 면역친화주 내에서 독소와 항체가 결합된 후 면역친화주를 세척하여 결합되지 않은 다른 물질을 제거한다.메탄올로 아플라톡신 M1을 씻어내고 분석기기에 주입해 검사에 사용한다.

【포장 구성】

아플라톡신 M1 표준품(옵션)

25자루/박스, 3mL 실린더/자루

제품 설명서 1부

【필요하지만 제공되지 않는 장비 및 시약】

장치:

┅┅ 고속 균질기 또는 조직 균질기

┅┅분쇄기

┅┅ 200mL/50mL 체통

┅┅천평: 감량 0.1g

┅┅산도계

┅┅ 분액 깔때기

┅┅ 미량 이액기: 단일 100mL~1000mL

┅┅ 슬롯 무늬 여과지 (접기 빠른 정성 또는 정량 여과지)

┅┅50mL 깔때기

┅┅ 회전 증발기

┅┅ 일회용 유리 시험관

┅┅ 펌프 흐름 조작 프레임 (공기 펌프, 다른 용적의 유리 주사기 등 포함)

┅┅비커, 용량병, 원추형 병 등

시약:

┅┅ 메탄올 (크로마토그래피 레벨)

┅┅아크릴(크로마토그래피급)

석유 에테르

┅┅ 증류수 또는 이온제거수

┅┅*용액 (0.5mol/L) 은 2g*를 취하여 100mL의 물에 용해한다

【샘플 처리 절차】

(1) 우유

┅┅우유수욕 100mL를 40oC로 가열한다.

┅┅4000r/min 원심분리 15min, 50mL 맑은 액체 수집 대기

(2) 유분과 분말형 영유아 레시피 식품

┅┅는 분유 샘플 10g을 채취하여 100mL50oC의 물을 여러 번 소량 첨가하여 섞어 분유가 충분히 용해되도록 한다고 한다

┅┅6000r/min 원심분리 15min, 50mL 맑은 액체 수집 대기

┅┅는 60g의 혼합된 시료를 취하여 0.5 mol/L의 * 용액으로 산도계에 pH를 7.4로 하향 조정하도록 지시한다;

┅┅는 고속 균질기로 9500회전/분 동안 균장 5min을 알려준다

┅┅수욕은 40oC로 가열한다.

┅┅4000r/min 원심분리 15min, 50mL 맑은 액체 수집 대기

(4) 치즈

┅┅는 가늘게 썰어 10개의 둥근 구멍을 체로 혼합한 시료 5g을 50mL의 원심관에 넣고 물 2mL와 메탄올 30mL를 첨가한다고 한다.

┅┅는 고속 균질기로 9500r/분 동안 균장 5min을 알려준다.

┅┅ 초음파 추출 30 min;

┅┅는 6000r/분 동안 원심에서 15min 떨어져 맑은 액체를 수집하고 250mL 분액 깔때기에 옮긴다.

┅┅는 분액깔때기에 석유에테르 30mL(4.3)를 넣고 2min 흔들어준다.

┅┅는 층을 나눈 후 하층을 50mL 비커에 옮겨 석유 에테르층을 버린다.

┅┅는 석유 에테르로 2회 추출을 반복한다;.

┅┅는 하층 용액을 100mL의 둥근 소병으로 옮기고 감압은 약 2mL로 농축한다. ┅┅농축액은 원심관에 붓고 소병은 아크릴-수용액(1+4) 5mL로 2회에 걸쳐 세탁하고 세척액은 50mL의 원심관에 함께 붓는다.

┅┅에 물을 가하여 약 50mL로 희석하고 6000회전/분하에서 원심분리 5min, 상청액은 정화처리한다.

(5) 크림

┅┅는 5g의 시료를 취하여 50mL의 비커에 넣는다고 한다.

┅┅는 20mL의 석유 에테르로 그것을 용해하여 250mL의 마개 원추형 병에 옮긴다.

┅┅는 물 20mL와 메탄올 30mL를 가하여 30min 진동한 후 모든 액체를 분액깔때기에 옮긴다.

┅┅는 층을 나눈 후 하층 용액을 모두 100mL 원형 플라스크로 옮겨 회전 증발기에서 감압 농축은 약 5mL, 물을 가하여 약 50mL로 희석하여 정화 처리한다.

【친화기둥 정화 절차】

┅┅는 면역친화주를 50.0mL 유리주사기 아래에 연결한다.투명액 50.0mL를 정확히 옮겨 유리 주사기에 주입한다.

┅┅는 공기압력펌프를 유리주사기와 련결하여 압력을 조절하여 용액이 약 2~3mL/min의 류속으로 면역친화주를 천천히 통과하고 2~3mL의 공기가 기둥을 통과할 때까지 압력을 조절한다.

┅┅는 10ml의 유리주사기를 교체하여 친화주와 련결시키고 주사기에 10ml의 물을 첨가하여 압력을 조절하여 물이 약 6mL/min의 류속으로 친화주를 세척하도록 한다.

┅┅는 정확하게 4mL 크로마토그래피급 아크릴을 첨가하여 씻어내고 유속은 1mL/min~2mL/min이며 모든 씻어낸 액을 유리시험관에 수집하여 검측용으로 제공한다.

[결과 판정]

면역친화기둥을 정화한 후 수집된 아크릴 세척액은 형광계나 HPLC를 직접 사용하여 검사할 수 있으며, 얇은 크로마토그래피나 효소 결합 면역 시약함을 사용하여 검사할 수도 있다.수집된 4ml 세척액의 아플라톡신 함량은 우유 샘플 50ml, 발효유 샘플 또는 분유 샘플 5g, 치즈 샘플 및 크림 샘플 중 아플라톡신 M1의 함량과 맞먹는다.

HPLC 검사에 다른 용매가 필요한 경우 아크릴 세척액 질소를 말린 다음 다시 녹일 수 있습니다.

【주의사항】

아플라톡신은 위해가 매우 크므로 장갑을 끼고 조작해야 한다.

┅┅가 사용한 유리 용기 및 아플라톡신 용액은 5% 농도의 차아염소산나트륨 용액으로 밤을 지새우는 것이 좋다.

┅┅ 유효 날짜가 지난 면역 친화주를 사용하지 마십시오.

【저장조건 및 보존기간】

저장 조건: 친화 기둥 2-8 ℃ 보존, 냉동 저장 불가.

보존 기간: 이 제품의 유효 기간은 12개월입니다.