인치수 줄기세포

제품 속성:

조직 출처: 치수조직

제품 사양: 5 × 105cells/T25 세포 배양병

세포 소개:

인치수 줄기세포자활막 조직 분리하기;치수 조직은 치아 내부의 치수강 안에 있다.치수강의 외형은 치체형태와 대체로 비슷하며 치관부의 수강이 비교적 크며 수실이라고 하고 치근부의 수강이 비교적 작다고 하는데 근관이라고 하고 근끝부에 작은 구멍이 있는데 이를 근첨공이라고 한다.치수조직은 주로 신경, 혈관, 림프와 결단조직, 그리고 치수 외주에 배열된 조아본질세포를 포함하는데 그 역할은 조아본질이다.치수는 병원성 자극물의 작용과 기체 저항력의 차이로 인해 서로 다른 병리 변화가 나타나며 임상적으로 일련의 다른 증상과 징후로 나타날 수 있다.치수 충혈 상태가 오래 지속되면 급성 치수염증으로 전환된다.간충질 줄기세포 (mesenchymal stem cells, MSCs) 는 배아 시기의 중배층 조직에서 유래한 것으로, 매우 강한 자기 복제와 다방향 분화 잠재력을 가지고 있으며, 지방 세포, 성골 세포, 연골 세포 및 근세포 등 다양한 종말 세포로 정향 분화 능력을 가지고 있으며, MSCs를 활용하여 연골 손상을 복구하는 것은 매우 좋은 응용 전망을 가지고 있으며, 현재 이미 골수, 지방, 활막, 뼈막, 뼈, 근육 세포, 제대 간 줄기 세포 및 제대 세포, 제대 세포 간 혈, 제대 조직 및 제대 세포 간의 혈액 세포를 분리할 수 있다.

방법 소개:

회사 실험실에서 분리된 콜라겐 효소 소화법, 저밀도 희석 복제 제조로 세포 총량은 약 5 × 10?cells/병.

품질 검사:

회사 실험실에서 분리된 CD90 면역 형광 감정은 순도가 90% 이상에 달하며 HIV-1, HBV, HCV, 지원체, 세균, 효모, 진균 등이 함유되어 있지 않다.

육성 정보:

배양기: FBS, 성장첨가제, Penicillin, Streptomycin 등 포함

환액 빈도: 2-3일에 한 번씩 환액

성장 특성: 벽 부착

세포 형태: 섬유질 세포 모양

세대 간 특성: 3-5세대 정도 전달 가능

소화액: 0.25%

배양조건: 기상: 공기, 95%;CO2，5%

세포를 냉동 보존하는 방법?

냉동보관방법 1: 냉동관을 4℃ 30~60분→(-20℃ 30분*)→-80℃ 16~18시간(또는 격야)→액체질소탱크 vaporphase에 넣어 장기간 보관한다.

냉동 보존 방법 2: 냉동관은 이미 설정된 프로그램의 프로그램 가능한 냉각기에 설치하여 분당 1-3 ℃ 에서 -80 ℃ 이하로 내린 다음 액체 질소 슬롯 vapor phase에 넣어 장기간 저장한다.-20 ℃ 는 1시간 이상 얼음 결정이 너무 커서 세포가 대량으로 죽는 것을 방지할 수 없으며, 이 단계를 건너뛰고 -80 ℃ 냉장고에 직접 넣을 수도 있지만, 생존율은 약간 낮아진다.

육성 작업:

1) 소생세포: 세포현액 1mL를 함유한 동존관을 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고 배지 4mL를 넣어 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 4분간 원심을 분리하고 상청액을 버리고 1-2mL 배양기를 보충한 후 골고루 분다.그리고 모든 세포현액을 배양병에 넣어 밤을 새운다(또는 세포현액을 10cm그릇에 넣고 약 8ml의 배양기를 넣어 밤을 새운다).다음 날 환액하고 세포밀도를 검사한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

1. 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤색한다.

2.소화액 1ml (0.25% Trypsin-0.53mM EDTA) 을 배양병에 넣고 37 ℃ 배양상자에 넣어 1~2분 동안 소화시킨 다음 현미경으로 세포의 소화 상황을 관찰한다. 만약 세포가 대부분 둥글게 변하고 탈락하면 신속하게 조작대로 가져가 배양병을 몇 번 두드린 후 소량의 배양기를 넣어 소화를 종료한다.

3. 6-8ml/병에 따라 배양기를 보충하고 가볍게 두드린 후 빨아들여 1000RPM 조건에서 4분간 원심을 분리하고 청액을 버리고 1-2mL의 배양액을 보충한 후 고루 분다.
4. 세포현액을 1:2 비율로 배양기 8ml를 함유한 새로운 그릇이나 병에 나눈다.

3) 세포동존: 세포의 생장상태가 양호할 때 세포동존을 진행할 수 있다.아래 T25병은 종류입니다.

1.세포가 동존할 때, 배지를 버린 후, PBS는 한 번 세척한 후 1ml를 첨가하고, 세포가 둥글게 변하여 탈락한 후, 1ml의 혈청이 함유된 배지를 첨가하여 소화를 종료하고, 혈구 계수판 계수를 사용할 수 있다.

2.4min 1000rpm 원심분리 상청 제거.혈청 중현세포 1ml를 첨가하고 세포 수량에 따라 혈청과 DMSO를 첨가하여 가볍게 섞는다. DMSO 종농도는 10%이고 세포밀도는 1x106/ml 이상이어야 한다. 각 동존관은 1ml의 세포현액을 동존한다. 동존관에 주의하여 표시를 잘 해야 한다.

3.냉동 보관관을 프로그램 냉각 박스에 넣고 -80도 냉장고에 넣고 2시간 후에 액체 질소 관개 저장에 들어간다.다음에 받을 수 있도록 냉동 보관소의 위치를 기록하세요.

실험 보고서:

제품은 과학 연구에만 사용됩니다.

1. 분리와 배양:

1. 무균 조건에서 1-3d령 SD 쥐의 심방 조직을 제거한 후 PBS로 이 조직 블록을 2회 세척한 후 1mm3 정도의 크기가 된다.

2. 조직 블록에 4mL 효소 소화액 (0.1% 와 0.1% I형 콜라겐 효소) 을 첨가하여 10s를 혼탁하고 37 ℃ 의 조건에서 10min 소화시킨 후 점적 파이프로 불어 단세포 현액을 만들어 자연적으로 침전시키고 상청을 수집하여 10 ℃ 의 S를 함유한 배지로 소화를 중지한 후 4 ℃ 에 배치한다.

3. 나머지 조직은 다시 3~4mL의 효소 소화액을 첨가하여 10s를 혼현하고 37 ℃ 를 10min 소화한 후, 상술한 방법에 따라 상청을 수집하고 소화를 중지한 후 4 ℃ 를 배치하고, 이 단계를 2-3회 반복하여 조직이 소화될 때까지 한다;

4. 200개의 스테인리스강 체망으로 세포 소화액을 여과하고, 1200r/min 원심 10min, 상청을 버리고, 침전 세포는 10% FBS DMEM/F12 배지 혼현을 함유하고, 25cm2 배지병에 접종하고, 37 ℃, 5% CO2 배지 상자에 배치하여 배지한다;

5. 차속으로 벽에 1h를 붙인 후 배양기를 흡출하여 실험 수요에 따라 6공판 중 접종하여 계속 배양한다.
2. 면역형광감정:
1. 심방근세포가 80% 융합될 때까지 성장할 때 배양기를 버리고 온육한 PBS로 세포를 2회 10min씩 씻은 다음 4% 의 폴리포름알데히드로 실온조건에서 15min 세포를 고정한다.

2. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 4 ℃ 조건에서 0.1% Triton X-100 투과막을 15min 사용한다.

3. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 실온 조건에서 4% BSA로 세포를 30min 폐쇄한다;

4, 1: 100의 비율로 알파-actin 1항을 희석한 후 4 ℃ 냉장고에 넣어 세포를 부화시켜 밤을 보낸다;

5. PBS는 세포를 3회 씻어 매번 10min씩 1: 150의 비율로 알파-액틴에 대한 2항을 희석하고 37 ℃ 조건에서 1h를 배치한다.

6. PBS로 10min씩 3회 헹군 후 거꾸로 형광현미경으로 이미지를 관찰하고 사진을 찍는다.
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