초어 간장세포;L8824

제품명: 초어 간장세포;L8824

제품 카테고리: 기타 세포계

성장 특성: 벽에 붙어서 성장

배양체계: DMEM(고당류) +10% FBS, 28° 또는 21° 배양

전대 방법: 1: 2 전대

동존 조건: 무혈청 세포 동존액

저장 기준: > 85%

규격: 1×10^6cells/T25 배양병

상품번호: CS-C2900

세포를 냉동 보존하는 방법:
냉동 보관 방법 1: 냉동 튜브는 4 ℃ 30~60 분 (-20 ℃ 30 분 *) -80 ℃ 16~18 시간 (또는 격야) 액체 질소 탱크 vaporphase에 장기 보관합니다.
냉동 보존 방법 2: 냉동관은 이미 설정된 프로그램의 프로그램 가능한 냉각기에 설치하여 분당 1-3 ℃ 에서 -80 ℃ 이하로 내린 다음 액체 질소 슬롯 vapor phase에 넣어 장기간 저장한다.*-20 ℃ 는 1시간 이상 얼음 결정이 너무 커서 세포가 대량으로 죽는 것을 방지할 수 없으며, 이 단계를 건너뛰고 -80 ℃ 냉장고에 직접 넣을 수도 있지만, 생존율은 약간 낮아진다.

표피조직은 배아 시기 외배층으로 형성돼 마찰과 손상에 강한 역할을 한다.회사 테크놀로지는 신선하거나 냉동된 쥐의 태아 표피 조직에서 고품질의 총 RNA, PCR이 준비한 스트립 cDNA 체인, 단백질 및 그 아성분을 제공한다.모든 제품은 출하 전에 품질을 보장하기 위해 엄격한 QA/QC 프로세스를 거칩니다.이 제품들은 유전자 복제, 표현 도감 분석 및 각종 분자 생물학 실험 연구에 직접 사용할 수 있다.
총 RNA 제조:Qiagen RNeasy Kit의 Trizol 시약을 이용하여 RNA를 분리한 후 Qiagen RNA Clean Kit으로 순화한다.회사가 제공한 총 RNA 시료에는 RNA 시료 총농도, 총함량, 전기수영 사진, OD값 측정 결과 등이 첨부됐다.

cDNA 제조:순화된 총 RNA는 cDNA 사슬을 합성하여 50ul 총 반응 체계로 역전록하며, 체계에는 MMLV 반전록 효소와 무작위 유인물, 총 RNA 10mg이 포함된다.68℃ 반응 10min 후 RT 반응 종료.1x RT Buffer를 이용하여 cDNA를 운송하면 1 ul cDNA는 PCR 반응을 한 번 하기에 충분하다.모든 cDNA 제품은 주문이 발송되기 전에 엄격한 QA/QC 분석을 거쳐 제품의 품질을 보장합니다.

단백질 제조:개량형을 이용하다RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)쥐의 태아 표피 조직 분해액을 제조하여 원심분리로 조직 파편을 제거하고, Bio-Rad 단백질 검사 키트를 통해 단백질 농도를 측정하며, 조직 단백질을 희석한 후 비환원 단백질 Buffer(50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)에 5% 베타-메틸 에탄올 및 PMSF를 첨가하여 -80도로 보관한다.

잠재적 애플리케이션: <1> 알려진 유전자의 PCR 클론;<2> mRNA 선택적 커팅;<3> 유전자 복제와 목표 시퀀싱;<4>Western and Northern Blot；<5> 단백질 검사와 단백질 그룹학;<6> 칩 연구 및 표현 도감.

세포 처리:

1) 소생세포: 세포현액 1mL가 함유된 동존관을 37℃ 의 수욕(수면은 동존관 뚜껑보다 낮아야 함)에 빠르게 넣고 흔들어 해동하며, 미리 준비한 4mL 배양기가 함유된 15ml 원심관에 옮겨 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 4분간 원심을 분리하고 상청액을 버리고 배지 1mL를 넣은 후 고루 분다.그리고 모든 세포현액을 배양기 5ml를 함유한 배양병에 옮겨 밤새 배양한다.다음 날 환액하고 세포밀도를 검사한다.
2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.
부유 세포의 경우 대물림은 다음 방법을 참조할 수 있습니다.
방법 1: 세포를 수집, 1000RPM, 상온 조건에서 5분 동안 원심을 분리하고, 맑은 액체를 버리고, 1-2mL 배양액을 보충한 후 골고루 불어, 세포 현액을 1: 2에서 1: 5의 비율로 새로운 8ml 배양기를 함유한 새 그릇이나 병에 나눈다.
방법 2: 반수 환액 방식을 선택할 수 있으며, 반수 배양기를 버린 후 남은 세포를 매달아 세포 현액을 1: 2에서 1: 3의 비율로 새로운 8ml 배양기를 함유한 새 그릇이나 병에 나눌 수 있다.
3) 세포동존: 세포의 생장상태가 양호할 때 세포동존을 진행할 수 있다.부유세포가 동존할 때는 세포를 수집하여 1000RPM, 상온조건에서 원심을 5분간 분리하고 상청액(세포가 흡입되지 않도록 방지)을 소량 보존하며 일부 신선한 배지를 넣고 골고루 불면 동존관에 첨가하고 동존관에 10% DMSO를 넣어 흔들어 동존한다.냉동 저장 배지
세포를 동존시킬 때는 반드시 권장하는 동존배지를 사용해야 한다.냉동 배지에는 DMSO나 글리세린 등 냉동 보호제가 함유되어 있어야 한다.특별히 조제된 * 냉동 저장 배지도 사용할 수 있다.
1) 세포동존배지는 포유동물 세포에 사용되는 즉용형 * 동존배지로서 태소의 혈청과 소의 혈청 비율이 최적화되어 세포의 활력과 해동 후의 세포소생효과를 개선할 수 있다.
2) 동존배지는 화학성분 확정, 무단백질, 무균 동존배지로 10% DMSO를 함유하고 있으며, 다양한 줄기세포와 원대세포(멜라닌세포 제외)의 동존에 적용된다.
운영 프로세스:
1.1 주요 시약과 기기: 역치 차이 현미경 (일본 olympus imt-413), co2 부화 상자 (일본 yamato it-61).
1.2 hek-293 세포의 소생 배양 전대 및 동존:
1.2.1 세포의 소생배양은 액체질소탱크에서 동존관을 꺼내 즉시 37 ℃ 의 수욕을 투입하고 끊임없이 흔들어 신속하게 녹인다.용해된 세포동존관을 꺼내 알코올로 소독한 후 열어 세포가 녹은 동존액을 빨아들이고, 미리 배양액(37 ℃ 예열, 8~10배 부피)을 담아 원심관에 살짝 섞어 준 후 1000rpm 5min으로 상청을 제거하고 적당량의 배양액을 넣어 세포현액(37 ℃ 예열, 8~10배 부피) 으로 1×105/ml 밀도로 25cm2 배양, 습도 및 37 ℃ 에 접종한다.
1.2.2 세포 전대 원대배양의 hek-293세포 48h 환액 1회, 세포 길이 60%~70% 융합 시 0.25% 소화 1~2min, 배양병을 다시 손바닥으로 가볍게 두드려 세포를 탈벽, 부상, 분산, 세포를 더욱 분산시키기 위해 취타관을 몇 번 가볍게 불어 세포 현액을 획득한 후 배양의 배양기를 첨가하여 부드럽게 섞고 균등하게 세포를 나누어 빨대를 혼합하여 혼합한다.
1.3 세포 형태의 관찰은 거꾸로 현미경 아래에서 세포의 생장 상황과 형태 특징을 관찰하고 기록한다.
1.4 세포의 계수 일반 소화 세포는 세포가 둥글게 변하고 벽이 벗겨지고 떠오르면 소량의 배양기 원심분리를 넣고 다시 pbs로 다시 매달고 불어서 세포현액을 만든다.세포계수판 덮개 유리조각의 한쪽에 미량의 세포현액을 넣고 10×물경으로 계수판 사각대방격세포수를 관찰하여 공식에 따라 세포수를 계산해낸다.세포수/ml 원액=(사각격세포수의 합/4)×104.
1.5 세포의 밀착률 지수 성장기의 세포는 0.25% 로 소화되어 단세포 현액으로 되어 있으며, 계수 후 각각 12개의 25cm2 배양병에 접종하여 2시간마다 무작위로 3병의 세포를 제거하고, 배양기 및 미밀착 세포를 흡입하고, 인슐린 소화효소를 첨가하여 소화, 계수된 밀착 세포를 계산하여 그 평균치를 취하며, 공식: 밀착률 (%) = (이미 부착 세포 수/접종률 100% 로 계산한다.
1.6 성장곡선취지수 성장기의 세포는 소화로 단세포현액을 만들어 24공판에 1×104/공으로 접종하고 공당 1ml 배지를 넣는다.매일 무작위로 3구멍을 뽑아 각 구멍의 세포 수를 계산하고 평균치를 계산한다.연속 계수 10d, 세포 성장 곡선 그리기.

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초어 간장세포;L8824인지효소 A2 elisa 키트 ≥ 4190% as determined by SDS-PAGE 2,5- 디페닐 2

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인화 아데노신 활성화 단백질 효소 elisa 키트 ≥ 4194% as determined by SDS-PAGE N, N'- (4,4'- 아기 디페닐) 더블 마래아미드

인화 세포 외 신호 조절 효소 elisa 테스트 박스 ≥ 4195% as determined by SDS-PAGE 인슐린 트리플루오로벤젠

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인화 단백질 효소 C elisa 테스트 박스 ≥ 4197% as determined by SDS-PAGE 2,4,5- 삼기 티아졸

인과당 효소 elisa 키트 ≥ 4198% as determined by SDS-PAGE 6-히드록시-2-나프탈렌 나트륨

글리세린 변위 효소 2 elisa 키트 ≥ 4199% as determined by SDS-PAGE 4- 불소-3- 키페닐알데히드

인간 림프구 인자 elisa 테스트 박스 ≥ 4200% as determined by SDS-PAGE 2, 3 - 디피리딘

인간 림프구 변형 인자 elisa 테스트 박스 ≥ 4201% as determined by SDS-PAGE 기3-에스테르

인림프구 항원 6 복합체 유전자자리 A elisa 시험함 ≥ 4202% as determined by SDS-PAGE L-발린 아세테이트 소금염

사람 림프구 기능 관련 항원 3 elisa 키트 ≥ 4203% as determined by SDS-PAGE 3, 4,5- 트리플루오로페닐아크릴

사람 림프구 기능 관련 항원 2 elisa 키트 ≥ 4204% as determined by SDS-PAGE 4- 키벤젠 붕소

실험 보고서:
1. 분리와 배양:
1. 무균 조건에서 1-3d령 SD 쥐의 심방 조직을 제거한 후 PBS로 이 조직 블록을 2회 세척한 후 1mm3 정도의 크기가 된다.
2. 조직 블록에 효소 소화액 4mL (0.1% 0.1% I형 콜라겐 효소) 을 첨가하여 10s 혼합하여 37 ℃ 의 조건에서 10min 소화시킨 후 점적 파이프로 불어 단세포 현액을 만들어 자연적으로 침전시키고 상청을 수집하여 10% FBS 배지 함유로 소화를 종료한 후 4 ℃ 로 배치한다;
3. 나머지 조직은 3~4mL의 효소 소화액을 첨가하여 10s를 혼합하여 37 ℃ 로 10min 소화한 후, 상술한 방법에 따라 상청을 수집하고 소화를 중지한 후 4 ℃ 로 배치하고, 이 단계를 2-3회 반복하여 조직 *이 소화될 때까지 한다;
4. 200개의 스테인리스강 체망으로 세포 소화액을 여과하고, 1200r/min 원심 10min, 상청을 버리고, 침전 세포는 10% FBS DMEM/F12 배지 혼현을 함유하고, 25cm2 배지병에 접종하고, 37 ℃, 5% CO2 배지 상자에 배치하여 배지한다;
5. 차속으로 벽에 1h를 붙인 후 배양기를 흡출하여 실험 수요에 따라 6공판 중 접종하여 계속 배양한다;
2. 면역형광감정:
1. 심방근세포가 80% 융합될 때까지 성장할 때 배양기를 버리고 온육한 PBS로 세포를 2회 10min씩 씻은 다음 4% 의 폴리포름알데히드로 실온조건에서 15min 세포를 고정한다.
2. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 4 ℃ 조건에서 0.1% Triton X-100 투과막을 15min 사용한다.
3. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 실온 조건에서 4% BSA로 세포를 30min 폐쇄한다;
4, 1: 100의 비율로 알파-actin 1항을 희석한 후 4 ℃ 냉장고에 넣어 세포를 부화시켜 밤을 보낸다;
5. PBS는 세포를 3회 씻어 매번 10min씩 1: 150의 비율로 알파-액틴에 대한 2항을 희석하고 37 ℃ 조건에서 1h를 배치한다.
6. PBS로 10min씩 3회 헹군 후 거꾸로 형광현미경으로 이미지를 관찰하고 사진을 찍는다.