시체 인자 Caspase-389 검사 실험

시체 인자 Caspase-389 검사 실험

카스파세3

카스파세세포가 죽는 과정에서 중요한 역할을 하는 프로테아제 가족입니다.CPP32라고도 하는 Caspase3은 세포가 죽는 과정에서 중요한 효소로 procaspase2.6.7과 9를 잘라낼 수 있으며 많은 caspase 바탕물을 직접 특이적으로 잘라낼 수 있습니다.PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolinfodrin 등입니다.카스파스 3가 전도하는 이 단백질 절단은 세포 멸망 분자 메커니즘의 중요한 구성 부분이다.카스파스 3는 세포핵이 죽는 과정에서도 염색질 고착을 포함한 핵심 역할을 했다

축소, DNA의 * * 단편화 등.아울러 카스파스 3는 세포 기포(Cell blebbing)에도 핵심적인 역할을 한다.

검사 원리는 casepase 3를 기반으로 하체 AC-DEVD-pNA가 노란색 pNA(-itroaniline)를 생성하도록 촉매할 수 있어 흡광도를 측정하여 caspase 3의 활성을 측정할 수 있다.pNA는 405nm 부근에서 강하게 흡수된다.황색 산물인 pNA가 만든 표준 곡선을 참조해 정량 카스파스 3 효소 활성의 표준품으로 활용할 수 있다.

카스파스-8

Caspase 8은 일반적으로 효소원의 형태로 존재하며 세포가 죽는 신호 전도 과정에서 활성화됩니다. Caspase 8은 세포가 죽는 신호 전도 과정에서 상류의 caspase로 간주됩니다. Fas-receptor와 TNFR-1이 전도하는 세포가 죽는 과정에서 caspase 8이 활성화되어 p18과 p10으로 구성된 이중합체를 형성하여 하류의 caspase 4를 더욱 활성화합니다.caspase 9 및 caspase 10.이 방법은 Caspase 8을 기반으로 하체 AC-IETD-pNA가 노란색 pNA(-nitraniline)를 생성하도록 촉매하여 흡광도를 측정하여 Caspase 8의 활성도를 측정 할 수 있습니다.pNA는 405nm 부근에서 강하게 흡수된다.검측 시료의 405nm OD값은 pNA에서 제작한 표준 곡선을 참조하여 시료의 Caspase 8 효소 활성을 계산할 수 있다.

카스파스-9

Caspase 9는 ICE-LAP6 또는 Mch6라고도 하며 세포입니다.쇠망신호 전달 중 업스트림 카스페이스.미토콘드리아가 세포색소 c를 방출하면 카스파스 9는 세포색소 c 및 Apaf1과 복합체를 형성하면서 활성화된다.활성화된 카스파스 9은 세포가 죽는 핵심 효소인 카스파스 3를 활성화해 후속 세포가 죽는 신호를 촉진한다.Caspase 9의 활성화는 인산화를 통해 조절할 수 있다.

이 방법은 Caspase 9를 기반으로 바탕 물질인 Ac-LEHD-pNA산"황색을 생성하는 pNA(p-nitroaniline)를 촉매하여 흡광도를 측정하여 측정할 수 있음

Caspase 9의 활성.pNA는 405nm 부근에서 강하게 흡수된다.검측 시료의 405nm OD값은 pNA에서 제작한 표준 곡선을 참조하여 시료의 Caspase 9 효소 활성을 계산할 수 있다.

카스파스1

Caspase2는

카스파스4

카스파스6

멸망인자 Caspase3/8/9 검측 샘플 준비:

1) 세포시료: 1x107개 세포 (약 1개 T25의 배양병세포량), 600g 4°C 원심분리 5분간 세포를 수집하여 상청을 조심스럽게 흡입하고 PBS를 한번 세탁한다.상청을 흡수한후 매 관의 세포견본에 100u 분해액을 첨가하여 중현침전, 빙욕분해를 15분간 한다.4°C 16000g 원심분리 10-15분, 상청을 빙욕예냉의 원심분리관으로 옮긴다.카스파스 3의 효소 활성을 즉시 측정하거나 -70 ° C에서 샘플을 보관합니다.동시에 소량의 샘플을 취하여 Bradford법으로 단백질농도를 측정하여 될수록 단백질농도가 1-3mg/ml에 달하도록 할수 있다.

2) 조직 샘플: 약 10mg의 조직에 100ul의 분해액을 넣고 얼음욕에 유리 균장기로 균일한다.그리고 균장액을 1.5ml) 원심관으로 옮기고 얼음욕은 5분 더 분해한다.4°C 16000g 원심분리 10-15분, 상청을 빙욕예냉의 원심분리관으로 옮긴다.카스파스 3의 효소 활성 즉시 측정 또는 -70°C 보존

견본.동시에 소량의 샘플을 취하여 Bradford법으로 단백질농도를 측정하여 될수록 단백질농도가 1-3mg/ml에 달하도록 할수 있다.

Caspase-3 활성 체크 표준 커브

실험 주기: 7-10 영업일 이내에 완료, 반복 검사 혜택.

고객 고려 사항

1. 항체: 사전 상담상해 연구생물, 항체 종속을 명확히 하고 이 항체를 사용할 수 있는지 여부를 명확히 한다.만약 쌍방이 협상하여 정할 수 없는 경우, 고객이 직접 구매하여 제공하거나 우리 회사가 대리 구매한다;

2. 표본 수집 및 보존:

① 조직 시료: 신선한 조직은 액체 질소 또는 70도로 보관하고 조직은 100mg(약 녹두 크기) 이상이어야 한다.

②배양세포: 세포계수를 통해 EP관에 5000000개 이상의 세포를 취하여 생리식염수 또는 단백질보호제 0.5ml를 첨가하여 골고루 섞은 후 냉장고(-70°C, 반복적으로 얼지 않음)에 보관한다.

③ 혈액세포 표본: 항응고관으로 혈액 샘플을 보존하거나 림프구 분리액으로 세포를 분리한 후 생리식염수 또는 단백질보호제 0.5ml를 첨가하여 보존(-70°C에서 장기간 보존할 수 있으며 반복적으로 얼지 않도록 한다)

④ 혈청 또는 세포배양액 표본: 원심에서 불순물을 제거한 후 EP관에 제거하여 보존(이상 4°C는 15~20일, -70°C는 장기간 보존할 수 있으며 반복적으로 얼지 않도록 한다)

3. 샘플 운송: 다음 중 하나를 선택하여 표본을 부칠 수 있다

① 조직 샘플, 세포 샘플은 드라이아이스로 운송하거나 단백질 보호제를 넣은 후 아이스팩으로 운송한다.

② 세포 샘플도 직접 속달우편으로 배양병을 부칠 수 있다 (밀봉은 오염되지 않고 배양액이 새지 않도록 보장하며 세포는 너무 가득 자라지 말고 50% 정도, 배양액을 가득 채운다).

③ 혈청 또는 상청액을 직접 얼음주머니에 넣어 부친다 (밀봉하여 액체가 새지 않도록 보장하며 길이 2~3일 가까이 되면 도착할수 있다.)

실험 대행 서비스: