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EV-Save™는세포 외낭포 보존 안정제(TFF용)
절향류여과법(TFF)은 효율적인 방법으로 세포외낭포(EV) 농축과 완충액 치환에 사용된다.TFF는 시료를 필터와 평행으로 흐르게 함으로써 시료가 필터에 쌓이는 것을 방지하고 시료 손실을 최소화합니다.또 EV 등 흡착이 쉬운 시료는 필름 흡착과 여과 작업 중 물리적 응력 때문에 회수율이 낮아질 수 있다.
EV-Save™ 세포 외낭포 보존 안정제(TFF용)는 TFF 처리 과정에서 물리적 응력과 막의 흡착을 줄여 EV 회수율을 높이기 위한 것이다.이 제품을 사용하면 효율적이고 안정적인 EV 재활용이 가능합니다.
◆ 특징
● TFF를 이용한 EV 순화, 농축 및 완충액 치환 과정에서의 EV 손상 억제 및 EV의 필터 흡착
●이 제품과 밸런싱 버퍼만 시료에 추가하면 간편하게 작동
●본 제품은 시험관 흡착으로 인한 EV 손실을 방지하고 동융 손상을 방지하며, 여과된 EV 용액은 직접 보관할 수 있다.
(참고: 이 효과는 완충액 교환 중에 이 제품을 추가한 경우에만 가능합니다.)
◆ 샘플 추천
●순화된 EV
●세포배양상청
혈청, 혈장 및 간섭 물질 함량이 높은 샘플에서는 흡착 방지 효과가 떨어질 수 있습니다.
◆ 추천 TFF 모듈
MicroKros mPES 100 kDa(Repligen, 제조번호: C02-E100-05-N)
다음 모듈을 사용할 수 있는지 확인했습니다.
●Pellicon XL UF Mod Biomax 100 kD 0.005m2 (밀리포어)
●단일 사용 디스커버 12" 100 kD 0.5 mm (사토리우스)
다음 모듈은 사용할 수 없습니다.
●오메가 막을 가진 최소 TFF 오오오메가 막 - 100K (Cytiva)
●TFF-Easy - 접수 흐름 여과기 EV 집중기 (HansaBio)
◆ 데이터
성능 데이터
완충액 교환 과정에서 순화된 EV의 회수율을 높인다
MassivEV 사용™ EV Purification Column PS(제품번호: 131-19491)는 골수유래간충질줄기세포(BMMSC)와 지방조직유래간충질줄기세포(ADMSC)의 세포배양에서 EV를 청중순화한다. 그리고 리플리젠의 TFF 시스템을 사용해 본 제품의 1/100량이 첨가된 HBS 완충액을 교체해 완충액을 교환한다.PS Capture 사용™ 외비체 ELISA 키트(스트렙토마이신 HRP)(제품 번호: 298-80601, 항체 사용 항CD63 또는 항CD81 항체 검사), 완충액 치환 후 EV 회수율을 평가한다.,EV 입자 입경 분포는 Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)를 사용하여 감지됩니다.
1) 엘리사

【결과】
이 제품을 추가하면 TFF 기반 치환 완충액에서 EV의 회수율이 높아지는 것을 관찰할 수 있다.
(2) NTA

【결과】
본 제품을 첨가한 후, 순화 EV 입자의 입경 분포는 뚜렷한 변화를 관찰하지 못했다.
TFF 기반 세포 배양에서 청중 순화 EV의 회수율 향상
TFF를 사용하여 세포를 20배 상청 농축한 다음 100배의 완충액으로 치환한다.본 제품은 1/100의 양으로 세포배양상청액과 치환완충액에 첨가합니다.CD63과 CD81의 ELISA 키트로 EV의 회수율을 측정하고, Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)로 EV 입자의 입경 분포를 측정한다.
(1) ELISA

【결과】
본 제품을 첨가함으로써 세포상청에서 순화된 EV의 회수율이 향상된 것을 관찰할 수 있다.
(2) NTA

【결과】
이 제품을 추가한 후 EV의 입자 입경 분포는 뚜렷한 변화를 관찰하지 못했다.
▶ 순화된 EV 흡착 억제 및 냉동 보호 효과
(1) 흡착 억제 효과
각각 EV-Save™ 세포 외낭포 보존 안정제 (제품 번호: 058-09261, 아래 글쓰기"일반 제품") 및 EV-Save™ 세포 외낭포 보존 안정제(TFF용) (아래 글쓰기'본 제품')는 순화된 EV 용액에 1/100의 양으로 첨가된다.이후 마이크로튜브로 옮겨 48시간 동안 보관한다.CD63과 CD81의 ELISA 키트를 이용해 EV의 함량을 측정한다.

(2) 냉동 보호 효과
TFF를 사용해 골수 유래 간 충질줄기세포(BMMSC) 배양에서 EV를 청중 순화한다. 본 제품을 순화된 EV 용액에 1/100의 양으로 추가한 후 3회 동결(-20℃에서 실온까지) 한다.CD63과 CD81의 ELISA 키트를 이용해 동융 전후의 EV 함량을 측정한다.

【결과】
이 제품은 흡착 억제 효과와 냉동 보호 효과가 있어 EV 보존에 이상적이다.
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