양부씨균(Br.melitensis) 핵산 검사 시약함

【제품명】양부씨균(Br.melitensis) 핵산 검사 시약함

【포장규격】50T/박스

【제품방법】실시간 형광PCR 법

양부씨균(Br.melitensis) 핵산 검사 시약함[주요 구성 성분]

RT-PCR 반응액, 혼합효소액, 양성대조, 음성대조.

【저장조건 및 유효기간】

빛을 피하다-20 ℃ 이하로 보관하고 반복적으로 얼지 않도록 하며 유효기간은 12개월이다.

【적용 기구】
ABI 시리즈, Bio-Rad 시리즈, Agilent Stratagene MX 시리즈, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Rotor-Gene 시리즈, 항저우 보일 시리즈 등 다중 채널 실시간 형광 정량 PCR 기기.

【검사방법】

시약 준비 (시약 준비 구역)

（1) 냉장고에서 시약함을 꺼내고 시약함에서 실험에 필요한 시약을 꺼내 충분히 녹여 섞고 순식간에 원심을 분리하여 관벽에 부착된 액체를 제거한다.

（2) 당번 실험에 필요한 반응수(n)를 계산하고 아래 표에 표시된 반응체계에 따라 당번 실험에 필요한 각종 시약량을 계산한다.

n = 음성대조수(1T) + 양성대조수(1T) + 오차예비량(1T) + 표본수

（3) 무균 원심관에 상술한 시약을 첨가하여 충분히 혼합한 후 순식간에 원심을 분리한다.시약을 20μL/관 분장량에 따라 PCR 반응관에 분장한다.

（4) PCR 반응관 뚜껑을 꼭 닫은 후 PCR 반응관을 샘플 처리구역으로 옮긴다.남은 시약은 -20 ℃ 이하 냉장고에 다시 넣어 냉동 보관한다.

2. 샘플 준비 (샘플 처리 영역)

쓰다QIAGEN, Roche 회사의 DNA 추출 qu 시약함 추출 quDNA, 구체적인 조작은 그 시약함 설명서에 따라 조작한다.

3. 샘플링

상술한 에서 제조한 것PCR 반응 샘플 튜브에 각각 처리된 측정 대기 표본 DNA 각 5μl, 최종 부피 25μl/튜브를 넣고 PCR 반응 뚜껑을 잘 덮은 후 순식간에 저속 원심분리하여 PCR 기기로 옮긴다.음성대조와 양성대조는 각각 5μL 시약함 자체의 음성대조 또는 양성대조품을 추가하여 종체적은 25μl/관으로 PCR 반응뚜껑을 잘 덮고 혼합한 후 순식간에 저속으로 원심을 분리하여 PCR 기기로 옮긴다.

PCR(PCR 확장 영역)

（1) 샘플처리구역에 준비된 PCR반응관을 취하여 실시간 형광정량PCR기 샘플홈의 상응한 위치에 배치하고 배치순서를 기록한다.

（2) 계량기를 눌러 핵산 증폭 관련 매개변수를 설정하여 PCR 증폭을 진행한다.

참고:ABI 시리즈 형광 PCR 기기는 설정 시 ROX 보정을 선택하지 않고 담금질 기단을 설정하여 None을 선택합니다.

[참조 값 (참조 범위)]

1. 시약함 유효성 판정:

（1) 양성 대조: 전형적인 S형 증폭 곡선 또는 Ct 값 ≤ 35가 있다.

（2) 음성대조: Ct값> 38 또는 Ct값이 없으며 선형은 직선 또는 경미한 사선으로 지수성장기가 없다.

2. 표본 결과 판정:

（1) 양성: 표본검사결과 Ct값 ≤ 35 또는 뚜렷한 지수성장기가 있다.

（2) 의심: 표본 검사 결과의 Ct 값은 35~38 범위입니다.이때 표본에 대해 중복검사를 진행해야 한다. 만약 중복실험결과 Ct값이 여전히 35~38범위내에 있고 뚜렷한 지수성장기가 있으면 양성으로 판정하고 그렇지 않을 경우 음성으로 판정한다.

（3) 음성: 표본 검사 결과 Ct 값> 38 또는 Ct 값이 없습니다.

[검증 방법의 한계]

검사 샘플 중 검사된 핵산 농도 함량이 본 시약함보다 낮은 경우di 검출 제한 dhi는 가짜 음성의 결과가 발생할 수 있습니다.

본 시약함은 표본의 초보적인 선별검사에만 사용되며 본 시약함의 양성검사결과에 대해서는 진일보 배양법을 사용하여 확진해야 한다.

【주의사항】

본 시약함을 사용하는 실험실은 국가 관련 부분에서 반포한 관련 유전자 증폭 검사 실험실 관리 규범에 따라 엄격히 관리해야 한다;

피하기 위해RNA 분해, 샘플 처리 과정은 0-4 ℃ 조건에서 조작해야 하며, 실험을 완료한 후 즉시 검사에 접속해야 한다;샘플 처리 과정에서 사용되는 기구 소모품은 무핵효소 처리를 거쳐야 한다;

각 구역의 물품은 모두 전용이므로 교차하여 사용해서는 안되며 오염을 피면한다.검사가 끝나면 즉시 작업대를 청소해야 합니다.

반응액을 흡수할 때는 기포가 생기는 것을 최대한 피해야 한다.상PCR 기기 전에는 액체가 증발해 결과가 정확하지 않도록 각 반응관이 꼭 닫혀 있는지 주의해서 검사해야 한다.

시약함의 모든 시약은 사용하기 전에 상온에서 충분히 녹여 혼합해야 하며 순식간에 원심을 분리해야 한다.

시약함 안에 배합된 음성과 양성 대조는 1차 사용 전에 모두 표본준비구역으로 옮겨 따로 보관해야 한다.

형광 방해를 방지하기 위해서, 맨손으로 직접 접촉하는 것을 피해야 한다.PCR 반응관, 그리고 PCR 반응관에 어떠한 표시도 피해야 한다;

검측 과정에서 사용한 흡머리는 담겨야 한다10% 차 염소산의 폐기물 항아리 안에서 검사가 끝난 PCR 반응관은 뚜껑을 열고 다른 폐품과 함께 멸균한 후 버리는 것을 삼가야 한다.작업대 및 각종 실험용품은 정기적으로 염소산 10%, 알코올 75% 또는 자외선등으로 소독해야 한다.

9. 기기 증폭 관련 파라미터는 본 설명서의 관련 요구에 따라 설치해야 한다.서로 다른 로트 시약은 혼용할 수 없다;유효 기간 내에 사용합니다.