소 혈소판 제4인자(PF-4) ELISA 키트

소 혈소판 제4인자(PF-4) ELISA 키트

저장 조건 및 유효기간

1. 시약함 보관: 2-8 ℃.

2. 유효기간: 6개월

실험 원리

이 시약함은 이중항체협심법을 응용하여 표본중의 우혈소판 제4인자 (PF-4) 수준을 측정한다.순화된 소 혈소판 제4인자(PF-4) 항체로 미공판을 감싸 고상항체를 만들고, 가방이 단항된 미공에 혈소판 제4인자(PF-4)를 차례로 넣은 뒤 HRP로 표시된 혈소판 제4인자(PF-4) 항체와 결합해 항체-항원-효소 표적 항체 복합체를 형성하고, 철-바닥 세척 후 바탕물인 TMB를 넣어 발색한다.TMB는 HRP 효소의 촉매로 파란색으로 바뀌고 산의 작용으로 최종 노란색으로 바뀐다.색상의 깊이는 시료의 혈소판 제4인자(PF-4)와 상관관계가 있다.효소표시기로 450nm 파장에서 흡광도(OD값)를 측정해 표준 곡선을 통해 시료 중 소 혈소판 제4인자(PF-4) 농도를 계산한다.

시약함 구성

130배 농축 세척액20ml×1병7종지액6ml×1병

2효소 표적 시약6ml×1병8표준품(40ng/ml)0.5ml×1병

3효소 표지판12구멍 x 8개9표준품 희석액1.5ml×1병

4샘플 희석액6ml×1병10설명서1부

5발색제 A액6ml×1병11봉판막2장

6발색제 B액6ml×1/병12봉지1개

작업 단계

1.표준품의 희석: 본 시약함은 원배 표준품 1개를 제공하며, 사용자는 아래 도표에 따라 작은 시험관에서 희석할 수 있다.

20ng/ml의5호 표준품150μl의 원배 표준품에 150μl 표준품 희석액을 첨가하다

10ng/ml의4호 표준품150μl의 5호 표준품에 150μl의 표준품 희석액을 첨가하다

5ng/ml의3호 표준품150μl의 4호 표준품에 150μl의 표준품 희석액을 첨가하다

2.5ng/ml의2호 표준품150μl의 3호 표준품에 150μl의 표준품 희석액을 첨가하다

1.25ng/ml의1호 표준품150μl의 2호 표준품에 150μl 표준품 희석액을 첨가하다

2.샘플링: 각각 빈 구멍 (공백 대조 구멍에 샘플 및 효소 표시 시약을 넣지 않고 나머지 각 단계는 동일하게 조작), 표준 구멍, 측정 대기 샘플 구멍을 설정합니다.효소 표지판 위에 표준품은 정확하게 50μl의 시료를 추가하고, 측정 대기 시료 구멍에 먼저 시료 희석액 40μl를 더한 후 측정 대기 시료 10μl(시료 최종 희석도는 5배)를 추가한다.샘플링은 샘플을 효소 표지판 구멍 밑부분에 추가하여 가능한 한 구멍 벽에 닿지 않고 가볍게 흔들어 골고루 섞는다.

3.온육: 봉판막으로 봉판한 후 37 ℃ 로 30분 동안 온육한다.

4.배액: 30배 농축 세척액용 증류수 30배 희석 예비용

5.세탁: 봉판막을 조심스럽게 벗기고, 액체를 버리고, 털어내고, 구멍마다 세척액을 가득 채우고, 30초 동안 가만히 둔 후 버리고, 이렇게 5회 반복하여 건진다.

6.효소첨가: 구멍당 효소표시시약 50μl, 공백구멍 제외.

7.온육: 조작동3.

8.세탁: 조작 동일 5.

9.발색: 구멍마다 발색제 A50 μl를 먼저 넣고 발색제 B50 μl를 넣어 가볍게 흔들어 섞고 37 ℃ 피광 발색 10분.

10.종료: 각 구멍에 종료액 50μl를 첨가하여 종료반응(이 때 파란색은 노란색으로 입전한다).

11.측정: 빈 구멍으로 0을 조정하고 450nm 파장으로 각 구멍의 흡광도(OD값)를 순차적으로 측정합니다.측정은 종료액을 넣은 후 15분 이내에 해야 한다.

계산

표준물의 농도를 가로 좌표, OD값을 세로 좌표로 하여 좌표지에 표준곡선을 그리고 샘플의 OD값에 따라 표준곡선에서 상응하는 농도를 찾아낸다.희석 배수를 곱하기;또는 표준물의 농도와 OD값으로 표준곡선의 직선회귀방정식을 계산하여 견본의 OD값을 방정식에 대입하여 견본의 농도를 계산하고 다시 희석배수를 곱하면 견본의 실제농도이다.

주의사항

1. 시약함은 냉장환경에서 꺼내면 실온균형이 15-30분 후에야 사용할 수 있으며, 효소표시봉투가 판으로 개봉된 후 다 쓰지 않으면 판자는 밀봉봉투에 넣어 보관해야 한다.

2. 진한 세척액은 결정이 석출될 수 있으므로 희석 시 수욕에서 온도를 높여 용해시킬 수 있으며 세척 시 결과에 영향을 주지 않는다.

3. 각 단계의 샘플링은 모두 샘플링기를 사용해야 하며, 항상 그 정확성을 교정하여 시험 오차를 피해야 한다.한 번의 샘플링 시간은 5분 이내로 통제하는 것이 좋다. 표본 수가 많으면 소총 샘플링을 사용하는 것을 추천한다.

4.매번 측정과 동시에 표준 곡선을 만들어 주세요.복공을 하는 것이 좋습니다.표본 중 측정할 물질의 함량이 너무 높을 경우 (표본 OD값이 표준 품공의 첫 번째 구멍의 OD값보다 크면) 먼저 시료 희석액으로 일정 배수 (n배) 를 희석한 후 측정하고, 계산할 때 마지막으로 총 희석 배수 (×n×5) 를 곱한다.

5.봉판막은 일회용으로만 사용하여 교차오염을 피한다.

6. 바탕은 빛을 피해 보관하세요.

7. 엄격히 설명서의 조작에 따라 진행하며 시험결과 판정은 반드시 효소표시기의 판독수를 기준으로 한다.

8. 모든 시료, 세척액과 각종 폐기물은 전염물에 따라 처리해야 한다.

9．소 혈소판 제4인자(PF-4) ELISA 키트서로 다른 로트 번호 그룹은 혼용해서는 안 된다.