1. 이 시험은 GB 5009.299-2024, NY/T 4439-2023 및 관련 단체 표준과 기업 표준을 참고하여 바씨 살균유, 초고온 멸균유와 영유아 조제분유의 유철단백질 함량을 측정한다.

2. 좋은 피크 및 분리도를 얻기 위해 시험은 시료 전 처리 및 액상 크로마토그래프 조건을 적절하게 최적화하여 기둥 온도 30 ℃, 유속 1.0 mL/min 조건에서0.1% 트리플루오로에틸산수 -0.1% 트리플루오로에틸아크릴유동상으로 경도 세척을 진행하며 시스템 최대 압력치는 106bar를 초과하지 않는다.

3. 시험 결과는 락토판 표준품 용액(50.0μg/mL) 크로마토그래피 피크 비대칭 인자 1.00으로 피크 모양이 양호하고 이론 탑판 수 30549로 기둥 효과가 우수하다는 것을 나타냈다.연속 3회 샘플링, 보존 시간과 피크 면적의 RSD는 모두 1% 미만으로 방법 재현성이 좋다;선형 저점(1.00μg/mL) 노이즈는 8.2로 방법의 민감도가 높다.선형 범위 1.00-200 μg/mL, 선형 상관계수 r²≥ 0.9998, 선형 양호.

4. 반상액상크로마토그래피로 유제품의 락틴함량을 측정하는 시험에서 BioBasic 4크로마토그래피기둥 (공경 300) 은 Vanquish Core 고효률액상크로마토그래피시스템에 배합하여 량호한 재현성과 우수한 안정성을 보여주었으며 방법검출제한과 정량제한은 모두 표준요구를 만족시켜 유제품기업 및 식품검측실험실에서 참고할수 있다.

1.1 샘플 추출

1.1.1액체 시료: 저온유(생우유, 바실살균유)/상온유(초고온(UHT) 멸균유)

시료 5g (정확히 0.1 mg까지) 을 50 mL 대 눈금 회전 덮개 원심관에서 인산염 완충액 Ⅱ로 25.0 mL로 정용하고 와선 진동 추출 3 min, 12000 rpm 4 ℃ 원심 15 min.실온을 안정시키고 상부의 지방을 제거하며 맑은 액체를 취하여 정화를 기다린다.

1.1.2고체 시료: 유분(영유아 조제분유)

시료 2g (0.1mg까지 정확함) 을 50mL 대 눈금 회전 덮개 원심관에 적당량의 인산염 완충액 Ⅱ 온열 진동 용해, 인산염 완충액 Ⅱ로 50.0mL로 정용, 와선 진동 추출 3min, 정지 30min 이상, 12000rpm 4 ℃ 원심 15min.실온을 안정시키고 상부의 지방을 제거하며 맑은 액체를 취하여 정화를 기다린다.

1.2 시료 정화

1.2.1활성화: HyperSep 간소 친화 기둥(P/N: 60105-110-B) 하단 Luer 커넥터를 고상 추출 장치에 연결하고, 상단은 어댑터(P/N: 60104-259)를 통해 10 mL 주사기 빈 통을 직렬하고, 2 × 5 mL 인산염 완충액 Ⅱ를 첨가하여 간소 친화를 활성화하고, 적속 2d/3s를 제어한다;

1.2.2상기 샘플: 활성화 단계 액면이 작은 기둥 체판에 접근할 때, 상기 샘플 10.0mL를 주사기 빈 통 (P/N: S7510-10) 으로 정확하게 이동하여 적속 2d/3s를 제어하고 유출액을 제거한다;

1.2.3림세: 시료단계의 액면이 소주체판에 접근할 때 2 × 5 mL 인산염완충액 Ⅱ를 첨가하여 소주를 림세하고 류출액을 버리고 어댑터와 주사기 빈통을 제거하며 음압으로 소주를 2min 추출한다.

1.2.4세척: 인산염 완충액 Ⅰ 2 × 2.5 mL를 첨가하여 세척하고, 모든 세척액을 수집하며, 인산염 완충액 Ⅰ로 5.00 mL로 정용하고, 0.2 μm 친수성 PTFE 침식 여과기 (P/N: 42213-NPL), 여과액은 기계 테스트를 기다리고 있다.

Thermo Scientific™ Vanquish Core™ 고효율 액상 크로마토그래피 시스템, 구성: 펌프 Quaternary Pump C(VC-P20-A), 자동 샘플러 Split Sampler CT(VC-A12-A), 기둥 온도 상자 Column Compartment C(VC-C10-A), 검출기 Diode Array Detector CG(VC-D11-A), 데이터 처리 Chromeleon™ 7.3

크로마토그래피 기둥: BioBasic 4, 5μm, 4.6×250mm(P/N: 72305-254630)

흐름상: A: 0.1% 트리플루오로에틸산수 B: 0.1% 트리플루오로에틸아크릴

유속: 1.0 mL/min

그라데이션 워싱 프로그램:

샘플링: 50 µL

기둥 온도: 30 ℃

검출기: DAD, 채집 파장: 280nm, 채집 주파수: 5Hz, 스펙트럼 채집: 190-400nm