통계에 의하면 가깝다80%의 유기물 및 무기물 은 고효율 액상 크로마토그래피 로 분리할 수 있는데, 그 중 반상 크로마토그래피 중의C18은크로마토그래피 기둥은 고효율 액상 크로마토그래피 중에서 가장 자주 사용하는 크로마토그래피 기둥이다.바로 아래C18은크로마토그래피 기둥의 선택, 정비와 수리를 소개하다.

하나,C18은기둥 선택

C18은에 대한 주요 고려 사항2하나의 문제, 즉 기둥 충전재와 기둥 규격이 크로마토그래피 기둥에 미치는 영향.

기둥 충전재의 물리적 성능은 충전재 크로마토그래피 행위에 중요한 영향을 미친다.충전재의 주요 물리적 성능은 과립도, 공경, 구멍 부피, 결합상 화학, 탄소 함유량 및 알킬화 처리를 포함한다.

(1)과립도는 기둥 충전재의 과립 직경의 크기를 가리킨다.실제로 크로마토그래프 기둥에 표시된 입경은 평균값이다.입경 같음 "5μm"기둥 속 충전재가 아니라 모든 입자의 직경이5μm, 실제로 입자 분포도가 있습니다.이런 분포도는 기둥의 반압 및 기둥 효과에 중요한 작용을 한다.일반적으로 평균 과립도가 작을수록 과립분포도가 작고 크로마토그래피의 기둥효과가 높을수록 반압도 높다.현재C18은기둥 충전재 입경은4～10μm사이.

(2)구멍 지름은 충전재 입자 사이의 구멍 간격을 가리킨다.일반적으로 말하는 공경은 충전재의 평균 공경을 가리킨다.구형 충전재는 기둥을 설치한 후 평균 공경 분포가 비교적 좁고 기둥 침대 구조가 균일하며 기둥 효과가 높고 재현성이 좋다.무정형 충전재의 평균 공경 분포가 비교적 넓고 기둥 침대 구조가 고르지 않으며 유동 상선성 속도가 고르지 않고 스펙트럼 대역폭이 넓다.평균 공경의 크기는 대분자 화합물을 분리하는 데 큰 영향을 미치며, 비교적 큰 분자가 함유된 샘플을 분리할 때 분자 저항 효과가 있거나 흡착 효과가 발생하여 정량의 회수율과 정확도에 영향을 줄 수 있다.따라서 단백질이나 폴리펩티드 샘플과 같은 반상 크로마토그래피로 분리할 때는 큰 공경을 선택하는 것을 고려해야 한다(예30 nm)의 반상주 충전재입니다.구멍 부피는 실리콘 다공성의 매개 변수로서 비교적 큰 분자 화합물을 분리 분석할 때 참고할 수 있으며, 비교적 큰 구멍 부피의 반상주 충전재를 선택할 수 있다.

(3)화학 결합상 충전재는 고효율 액상 크로마토그래피에서 매우 중요한 지위를 차지한다.그것은 극성이 비교적 큰 유기기단을 결합시켜 극성이 비교적 작은 용제를 류동상으로 사용할수 있다.또한 극성이 비교적 작은 유기기단을 결합하여 극성이 비교적 큰 용제를 선택하여 류동상으로 할수도 있다.C18은크로마토그래피 기둥은 실리콘화 결합형이다(Si-O-Si-C)존재하는데, 이러한 키 조합 반응은 현재 가장 보편적으로 응용되고 있다.예를 들어 18 알킬 트리클로로 실리콘과 전다공형 실리콘M-포라실C18반응 생성 알킬 화학 결합상, 상품명M-Bondapak-C18는。

(4)탄소 함량은 충전재 중의 탄소 함유량이다.전통적인 측정 기술은 충전재를 탄화수소 결합이 끊어질 때까지 가열한 다음 손실된 무게나 형성된 이산화탄소를 측정하여 탄소 함량을 계산하는 것이다.탄소 키의 길이를 늘리거나 키 밀도를 증가시켜 탄소 함량을 증가시킬 수 있다.탄소 함량이 증가하면 기둥의 보존치가 증가한다.결합상의 크로마토그래피 행위는 결합밀도와 관련이 있으며, 실리콘의 밀도 및 충전재의 표면적과도 관련이 있으며, 충전재의 밀도가 높을수록 기둥을 채우는 데 필요한 실리콘의 양이 많고 기둥의 탄소 함유량도 높다.하면, 만약, 만약...2밀도가 다른 동일한 탄소 함량의 충전재가 기둥을 채우면 보존 행위가 현저히 달라진다.따라서 단독으로 탄소 함량으로 크로마토그래피 행위를 예측하는 것은 부족하다.

(5) C18실리콘화 시약은2nm대분자, 따라서 이미 인접한 실리콘 기 위에 결합될 것이다C18은실리콘화 시약은 심각한 입체 저항을 일으킨다.그 결과 실리콘 표면에 대량의 잔류 실리콘 알코올기가 실리콘화 시약과 반응하지 않게 되었는데, 이러한 극성 실리콘 알코올기는 일정한 크로마토그래피 조건에서 알칼리성 화합물과 상호작용하여 피크 드래그를 일으켜 정량 분석 결과에 영향을 줄 수 있다.이런 문제들은 어느 정도 알킬화 처리를 통해 극복할 수 있다.알킬화 처리는 실리콘 표면에 있는 실리콘 알코올기를 줄이기 위해 결합상에서 이루어지는 독립적인 반응이다.알킬화 처리 는 소분자 를 채택한다(트리메틸 실리콘)의 시약은 공간 저항이C18은기단.대부분의 고정 이미지30%덮어쓸 수 있는 키 조합 위치입니다.보도에 따르면, 일부 매우 활발한 화학 시약 및 특수한 반응 조건을 통해 가장 높은 커버리지는50%실리콘 결합상의 물리적 특성을 잘 이해하면 고효율 액상 크로마토그래피의 반응에서 적합한 크로마토그래피 기둥을 선택하는 데 도움이 될 것이다.겉으로 보다C18은기둥은 비록 화학 관능단이 같지만, 실제로는 다른 브랜드의C18은원통의 성능이 크게 다르기 때문에 분리 결과가 다를 수 있습니다.

기둥 충전재의 선택은 크로마토그래피 분리의 가능성과 관계되며, 기둥 규격의 선택은 분석 속도, 분리 능력, 검측 능력 및 매번 분석하는 용제 소모 등에 직접적인 영향을 미친다.기둥 사양은 기둥 내부 지름과 기둥 길이의 두 가지 측면을 포함합니다.기둥 내경, 분석형은 일반적으로2～6개의 mm,제조형20개의 mm큰 것은 도달할 수 있다80 미미터; 원통 길이, 분석 유형5～30cm의, 제조형15～50cm의. 일반적으로 기둥 내경은 분리도와 분석 시간의 관계에 영향을 주지 않습니다.오늘날 기둥 기술은 서로 다른 기둥 내경의 기둥이 같은 성능을 가질 수 있도록 발전했다.서로 다른 내경의 기둥은 또 각기 다른 특징을 가지고 있으며, 같은 분석 시간과 분리도에 있어서 내경이 큰 기둥은 내경이 작은 기둥보다 용제를 많이 소모한다.다른 한편으로 비교적 작은 내경의 기둥은 같은 검측신호에 있어서 필요한 견본량도 비교적 적다.따라서 샘플의 양에는 * 가 있으며 작은 내경 기둥을 사용할 수 있습니다.기둥의 길이가 증가하면 분리 효과가 개선되지만 저항력도 따라서 증가하므로 입구의 압력을 높여야 한다.주압은 분리도 증가와 분석 시간 감소에 동시에 영향을 주는 주요 장애물이다.분리도, 분석 시간 및 주압의 세 가지는 서로 제약하고 그 중 두 가지를 잘 선택하면3한 가지 요소도 다 골랐다.긴 기둥은 높은 이율을 줄 수 있고, 짧은 기둥은 빠른 분리를 제공할 수 있으며, 우리는 샘플 상황에 따라 적합한 크로마토그래피 기둥을 선택할 수 있다.

C18은기둥 선택의 기본 원칙:

(1)알킬화 처리를 거쳐 봉인된 충전재를 선택하면 알칼리성 화합물의 꼬리를 끄는 현상을 방지할 수 있다.

(2)탄소 함유량이 높은 기둥을 골라 보존치를 높인다.

(3)비교적 짧은 기둥을 골라 쓰다.(예15 cm，7.5 cm)。

(4)작은 입자도의 충전재를 골라 쓰다.

(5)분자량이 많은 그룹에는 대공경 충전재를 사용한 기둥을 선택한다.

2.C18은원통의 일상적인 사용 및 유지 관리

일상적인 분리 분석 작업에서 크로마토그래피 기둥의 사용이 적절한지 여부는 크로마토그래피 기둥의 수명에 직접적인 영향을 미친다.아래 설명C18은기둥을 일상적으로 사용하는 과정에서 주의해야 할 사항.

(1)기둥은 하역, 교체할 때 동작이 가볍고 이음매를 적당히 조여야 한다.기둥 침대에 틈이 생기지 않도록 비교적 강한 기계 진동을 방지해야 한다.

(2)만약 기기가 일반적인 분석에 사용된다면, 샘플의 종류는 제한되어 있지만, 분석 횟수가 많으면, 모든 종류의 일반적인 분석에 대해 배치해도 무방하다1뿌리 전용 기둥, 이렇게 하면 기둥의 수명을 연장하는 데 도움이 된다.

(3)만약 기둥온도제어장치를 사용할 때에는 류동상이 뚫린후에야 온도가 상승하는데 주의를 돌려야 한다.

(4)흐름상 사용 전에 탈기 처리를 하여 기둥 효과와 영향 검사 등을 낮추지 않도록 해야 한다.시료 용액은 기둥 오염과 막힘을 줄이기 위해 적당한 전처리 및 여과를 거쳐야 한다.

(5)유동상 종류를 바꿀 때는 용제의 상호용해성에 유의해 염분 현상이 발생하지 않도록 해야 한다.

(6)기둥의 실제 조작 압력은 포장할 때의 최고 압력보다 낮아야 하며, 최고 압력의 절반 이하가 가장 좋다.보통 넘지 않는다20 593.965～29 419.95 kPa. 낮은 압력(≤14 709.975 kPa)의 범위에서 사용하면 기둥이 장기간 높은 기둥 효과를 유지할 수 있습니다.

(7) C18크로마토그래피 기둥은 비극성 결합상 크로마토그래피 기둥에 속하며, 유동상의pH값은 다음과 같이 엄격히 제어해야 합니다.2～7기둥을 손상시키지 않도록 사이.

(8)분리 분석 작업을 완료한 후 즉시 중단해서는 안 되며, 크로마토그래피 분석 시스템을 적시에 현상해야 합니다. 일반0.5 시간이상, 크로마토그래피 기둥 내의 불순물을 제거합니다.

(9)만약 류동상중에 염류가 있다면 우선 물로 충분히 씻어야 한다.아민류라면(트리메틸아민류 또는 테트라부틸아민류)흐름상에 추가, 사용50%메탄올과0.05%인산 용액 혼합 용제로 씻어라, 물로만 씻지 말고.

(10) C18일반적으로 메탄올을 보존용제로 사용하여 기둥이 말라서 파손되는 것을 방지한다.물이나 완충 용액이 장시간 크로마토그래피 흐름로에 보존되는 것을 엄금한다.

(11)적합한 것을 골라 쓰다.C18은불순물 입자 및 역흡착이 불가능한 방해물로부터 분석 기둥을 보호하기 위해 기둥을 보호합니다.보호기둥 내 충전재의 과립도는 분석기둥 충전재의 과립도와 가능한 한 일치해야 한다.

(12)기둥의 보존 기간은 너무 길어서는 안 된다.당분간은 안 써요.C18은기둥, 메탄올로 씻어30～60 분그런 다음 기둥의 양쪽 끝을 밀봉합니다.비교적 장기간 사용하지 않는 기둥은 첫째, 정기적으로 씻고 다시 밀봉하는 방법을 취한다.둘째는 씻은 후, 기둥 양쪽 끝을 각각 설치한다.1일정 용량의 메탄올을 가득 채운 용기(한쪽만 넣어도 돼요.)비교적 긴 보관 기간에 기둥 내 용제의 증발을 보충한다.

셋,C18은기둥 수리

크로마토그래피 기둥은 일상적인 사용 과정에서 비록 보호가 엄격하지만, 샘플과 유동상은 비록 전처리를 거쳤지만, 장시간의 사용을 거쳐 여전히 * 기둥이 오염되는 것을 피하기 어렵고, 고정상 유실, 판결, 주상 함몰 및 기둥 효과 저하 등이다.일부는 수리를 통해 일부 기둥 효과를 복구할 수 있습니다.

일,기둥 오염 재생 기술

크로마토그래피 기둥이 오염되면 적합한 용제로 씻어 기둥의 효과를 재생시킬 수 있다.C18은기둥의 일반적인 재생 세척 방법은 각각 메탄올, 트리클로로티아탄을 사용하는 것이다메탄올/ 물 각각60 ml순서대로 크로마토그래피 기둥을 통과하고 메탄올을 사용하다60 ml크로마토그래피 기둥의 균형을 맞춘 후 봉인하면 기둥 효과가 정상으로 회복됩니다.필요한 경우 기둥 오염 성질에 따라(유기오염, 염류오염 등), 채택0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4또는0.1 mol/L EDTA나트륨과 소금을 씻은 후 다시 물로 씻고, 마지막에는 메탄올로 크로마토그래피 기둥을 균형 있게 한 후 봉인한다.심각한 오염의C18은기둥, 물, 메탄올, 클로로포름, 에탄을 순서대로 씻은 후, 순서대로 거꾸로 하여 다시 씻을 수 있다1번, 매번 사용하는 용매60 ml, 검출기를 연결하지 않고 마지막에 메탄올 균형 크로마토그래피 기둥으로 봉인한다.

이,기둥 오염의 복구

기둥 오염 재생이 무효이거나 이미 알려진 기둥 오염이 심각할 경우 기둥 보수 방법으로 해결할 수 있지만, 기둥 오염 깊이를 초과해서는 안 된다5개의 mm방법은 특수 제작된 작은 삽으로 오염된 부분을 파낸 다음 기둥 충전재와 같은 고정상과 유동상을 혼합하여 펄프 모양을 만든 다음 펄프 모양의 고정상을 파낸 부분에 자세히 보충하는 것이다(가능한 한 뒤에 메우는 고정을 원래의 밀착 정도에 가깝게 하다), 평면을 다듬으면 됩니다.고친 기둥은 기둥 머리 양쪽 끝의 체판의 공경이 일치하면 기둥을 거꾸로 돌려 일반 시간을 사용할 수 있는데, 그 목적은 유동상 세척 작용을 빌어 기둥 침대의 긴밀도를 회복하는 것이다.

삼,기둥 함몰의 복구

기둥이 내려앉은 원인은 매우 많다.함몰이 심하지 않을 경우 기둥 머리 양쪽 끝의 체판 공경이 일치하면 기둥을 일반 시간으로 거꾸로 사용하면 성능을 회복할 수 있다.함몰이 심하면(5 mm)左右)이때 기둥 오염을 복구하는 방법으로 수리하면 된다.