오류 1: 계기 통로가 많을수록 좋다

PCR 기술의 성숙한 운용에 따라 다중 증폭이 갈수록 시끌벅적해지고 형광 정량 PCR 기기도 피할 수 없다.zui 초기 ABI 회사가 출시한 단일 채널 형광 정량 PCR 기기에서 현재 각 업체가 4 채널, 5 채널 심지어 6 채널 형광 정량 PCR 기기를 출시하기까지 현란한 선택은 어쩔 수 없이 어떤 사람은 조심하지 않고"채널이 많을수록 좋다"는 잘못된 구역에 들어갔다.

일부 제조업체의 5채널의 형광정량기를 사용할 때 실험결과의 성과 정확성을 확보하기 위하여 모두 실험에서 ROX (일종의 형광염료) 또는 Reference dye를 사용해야 하는데 이런 형광염료는 모두 하나의 검측통로를 단독으로 사용해야 한다.이렇게 되면 실제로 다중 PCR 형광 신호를 감지 할 수있는 효과적인 채널은 4 개에 불과하며 보정 염료를 사용하면 후기 사용 비용이 증가 할 수 있습니다.어떤 형광정량PCR의 검측통로는 자기 공장의 형광염료나 시약만을 위해 개방되였고 효과적인 검측통로도 선전자료에서 공언한것처럼 그렇게 많지 않았다.구매하기 전에 형광정량 PCR 기기의 효과적인 검사 통로를 확인하는 것이 특히 중요하기 때문에 홍보만 들어서는 안 된다.다중형광정량PCR의 통로수를 고려할 때도 실험실의 실제상황으로부터 출발해야 한다. 다중PCR은 사람마다 적용되고 사람마다 사용할수 있는것이 아니다. 왜냐하면 그것은 실험을 복잡하게 하기때문이다.

오류 2: real-time PCR 기기는 그라데이션 기능이 필요 없음

염료법을 사용한 정량 PCR 반응의 경우 다양한 PCR 유인물 설계 소프트웨어나 경험 공식으로 용해온도(Tm값)를 계산하지만 운용하는 공식이 다르고 유인물 서열이 달라 Tm값의 차이가 크다.유인물의 용해 온도가 퇴화 온도를 결정한다.또한 템플릿에서 염기의 조합은 변화무쌍하다. 특수한 단편에 대해 경험 공식이 얻은 데이터는 반드시 정확한 결과를 얻을 수 있는 것은 아니다. 퇴화 온도의 미세한 차이는 결과에 결정적인 영향을 미칠 수 있다. 따라서"조건을 만지는 것"은 한때 골치 아픈 문제였다.그라데이션 PCR의 출현은 반응 과정에서 각 구멍의 온도 제어 조건이 범위 내에서 그라데이션에 따라 변화할 수 있고, 결과에 따라 한 걸음에 모색할 수 있는 반응 조건을 일부 해결했다.

퇴화 온도뿐만 아니라 변성 온도와 확장 온도도 최적화할 수 있습니다. Invitrogen, Clontech, Promega와 같은 다양한 중합 효소 혼합 효소의 대부분의 하이파이 Taq 효소 증폭에 있어서 이것은 매우 중요합니다. Taq와 보정 효소의 * 반응 온도는 현저한 차이가 있을 수 있기 때문에 확장 온도를 최적화하는 것이 중요합니다.

그라데이션 기능이 있는 형광 정량 PCR을 사용하면 이전에 여러 차례 실험을 해야만 완성할 수 있었던 최적화 과정을 한 번에 완성할 수 있으며, PCR 반응 조건을 모색하는 번거로운 실험을 간소화하여 실험 시간 인상률과 실험 원가를 절약할 수 있다.