자가포식은 약물 치료의 유망한 표적이 된다

자가포식과 그 불균형은 이미 신경 퇴행성 질병과 암에서 발견되었다발휘중요한 역할을 하기 때문에 이 과정에서 새로운 치료 표적을 발견하는 것은 이미 유망한 약물 치료 방법이 되었다.자가포식은 세포의 스트레스 하에서 손상된 단백질과 세포기를 분해하고 회수하는 조절 과정이다1，2。에자가포식체라고 불리는 주머니물에 담가 통과시키다파괴로 표시된 세포 성분 주위에 쌍막을 형성해서진행조립1. 자가포식체 낭포는 이후 용해효소체와 융합해 그 내용물을 전달해 용해효소체의 수해효소가 분해되도록 한다.

자가포식은 여러 가지 복잡한 생리적, 병리적 생리적 작용을 가지고 있는데, 예를 들면 영양 기아에 적응하고, 손상된 세포 내 단백질과 세포기를 제거하고, 세포 발육, 항노화, 미생물 제거, 세포 사망, 종양 억제와 항원 증발2미토콘드리아 분열은 미토콘드리아에 대한 자가포식의 선택적 분해이다3. 이 절차는 일반적으로로세포 손상이나 스트레스 후 결함이 있는 미토콘드리아를 제거하다.

재료

• PC12는인간 신경모세포종 세포계 (ATCC는）

• 384 슬롯 (그레이너）

• 세포 id®자가포식 검사 키트(ENZO 생명 과학）

• 주황색 미토콘드리아 염료

• Hoechst 33342는

• ImageXpress는Pico®는자동화된 세포 이미징 시스템 (분자 장치）

• CellReporterXpress는 데이터 수집 및 분석 소프트웨어（분자 장치）

이점

정량 화합물 이 자식 과정 에 미치는 영향

핵 마커를 사용하여 세포를 분할하고, 검측과 표징이 작다의 목표물

자동 이미징을 사용하여 신뢰할 수 있는 통계

자동 세포 영상을 사용하여 자가포식체 입자를 측정하고 정량하다

자가 포식에 미치는 영향 평가

이 응용 프로그램 설명 중평가했습니다ImageXpress는Pico는자동화된 세포 영상 시스템은 자가포식체 입자의 효율을 측정하고 정량한다.PC12는인간 신경세포종 세포계는 검사 개발 모델로 활용된다.세포를 6，000 개세포/구멍 접종384공판 속, 부화48시간.자가포식에 미치는 영향을 평가하기 위해시키다다른 농도의 클로로퀸이나 빌라파미로 세포를 처리하다48시간.베라파미가능자식을 유도하고 클로로퀸은가능과립의 누적을 초래하는 자식체의 분해를 억제하다.화합물처리 후, 사용세포 id®자가포식 검사시약함 대용세포를 염색하여표시종적자식체.또한 형광 미토콘드리아 염료를 사용하여 미토콘드리아를 감지하고 사용Hoechst는세포핵 식별 (농도각각 0.2 μM화 1 μM）。사용코디20X또는40X물경의ImageXpress는Pico는시스템 및 세 개의 검사 채널（FITC는、TRITC는화청색 형광）대세포영상을 만들다.에서20X물경다음 각 구멍에서 이미지를 수집합니다.40X거울 아래구멍당채집2-4신뢰할 수 있는 통계를 위한 이미지사용CellReporterXpress는이미지 수집 및 분석 소프트웨어의 자식 또는 미토콘드리아 응용 프로그램에서 이미지를 분석합니다.

그림 1：자가포식체 검사.위의 그림은 경과를 나타냈다과자가포식 유도제 클로로퀸(30 pM) 처리 및시키다사용세포 id염료 염색의PC12는세포의 대표적인 자가포식 세포 이미지와 분석 마스크.에서CellReporterXpress는소프트웨어에서 점 분할을 사용하여 자식 입자를 식별합니다.세포핵다음으로 표시파란색, 미토콘드리아다음으로 표시주황색, 자가포식다음으로 표시녹색.아래그림표시사용주황색 미토콘드리아 완전성 염료로 미처리 세포를 염색하다。미토콘드리아 체크에 사용되는 이미지 및 분석 마스크입니다.

이러한 알고리즘은로검사와 표징이 작다의 목표물예를 들어 세포질 중의 자식체나 미토콘드리아는 동시에 핵 표기를 사용하여 세포를 분할한다.자가포식 측정을 위한 정량검사총 입자 또는 평균, 입자 (아세포 개체) 의 총 면적 또는 평균 면적 및 강도를 포함합니다.클로로퀸 (30 μM) 처리후세포의 대표적인 이미지와 분석 마스크는 그림과 같다1와 같습니다.검사측정클로로퀸과 베라파미처리 후 세포의 농도 반응 및 평가EC는50값.총자식체 계수의 데이터에 따르면클로로퀸과 빌라파미 처리사세포자식 수준이 각각 증가하다4.6배 및3.3배（EC는50값은 각각4.0화3.6 μM）。

결론

이 방법과세포 id물감결합자가포식 입자를 검출하는 데 사용할 수 있으며, 개발 및 정량 화합물이 자가포식 과정에 미치는 영향을 측정하는 데 사용할 수 있다.

참고문헌

1. 1. 미즈시마, N;Komatsu, M (2011).Autophagy : 세포와 조직의 회복.세포 147: 728–41

2. 2. 미즈시마, N; (2007).자식: 과정과 기능, 유전자 및 개발. 21: 2861-2873