소개

세포 수, 번식, 건강, 융합도 및 세포 독성을 모니터링하는 다양한 생물학적 응용에 대한 필요성없음표기세포검사. 이러한 애플리케이션필요효과적이고 신뢰할 수 있는 투과광 사용(TL)세포를 정량하고 다양한 세포의 반응과 형태를 평가하기 위한 정확한 분할을 제공하는 이미징 및 분석 기능그 밖에 높은 대비도 투사 광선 영상과 형광 표기 영상의 결합은 많은 세포 기반 검사에 대해분석말하자면 매우 중요한 것이다.

MetaXpress는 6.5사용자 정의 모듈 편집기의TL세포분할 알고리즘은 투사광선을 사용하여 세포를 영상화하는 것이다및정량의 최적화되고 신뢰할 수 있는 분석 알고리즘.이 응용 프로그램 설명은 다음과 같습니다.TL세포분할의 실용성과 정확성。투과광 중의 총세포 계수와 형광 염색의 세포핵 계수를 비교하여 분석하고 정량하다CHO는화HeLa는세포의 알고리즘 (그림 1）。

방법

~을CHO는화HeLa는세포 희석액은 검은색, 바닥에 접종한다투명했어96구멍 플레이트에서 위쪽 행보드 시작 (최위 행에서구멍당20，000개 세포）. 각 세포를1：2의 비율은마이크로 보드에서 아래로 진행희석，6개 복수 구멍。세포배양24시간후, 에서37°C、5%의 CO2 의 배양함 중용Hoechst 33342는세포핵 염료가 세포에 염색되다30분.그리고4%폴리포름알데히드 고정 세포 병용DPBS는세탁 두 번.통과ImageXpress는® 마이크로고내포 이미징 시스템 및MetaXpress는소프트웨어가 세포를 영상화하다.사용10x 플로어 계획대물렌즈는 한 시야를 이미징하여 최대1500개 세포.투과광 및청색 형광형광 채널 촬영 영상, 노출 시간은 각각15 MS화35 MS。

이점

사용
투과광 영상 쌍목표물분할 및 계수 모니터링투과광 하의세포 증식

다양한 분석 방법 사용평가TL세포 분할 알고리즘의 효과

다양한 세포 유형과 크기의계량화 도구
정량 및 분석 도구

그림 1：투과광 분석을 위한 설정촬영의HeLa는화CHO는세포이미지의 사용자 정의 모듈입니다. 시키다사용Hoechst 33342는세포핵 염료가 세포를 염색하다.사용청색 형광채널 및투과광(TL)진행세포 이미징,설정투과광 영상 및 세포 핵 형광 영상에 따라 세포를 분석하고 정량하기 위해 모듈을 사용자 정의합니다.

사용자 정의 모듈 편집기설정TL세포 분할 알고리즘

정확한 세포 분할은 투과광을 통해 포획된 세포를 정량하는 데 매우 중요하다.위TL세포분할선택된 세포알고리즘A가능정확하게 분할화인식HeLa는화CHO는세포 （그림 2）。다른 설정도 선택할 수 있습니다.세포알고리즘B또는 세포알고리즘C가구별소세포 또는 대세포 분석에 사용。분석 중모듈에서설정 가능전체 영역 필터링보다 작음150 pM의2의 세포 (그림 3）。이개 설정가로포위된 작은 사세포를 피하기 위해취급살아있는 세포는 계수와 분석을 한다.또한설정된 세포핵 계수 알고리즘은로정확정량HeLa는화CHO는의세포핵 (그림 4）。

결합투사광하의 세포계수와 형광포핵계수

사용TL세포 분할 알고리즘설정의 사용자 정의 모듈을 정확하게 분할할 수 있습니다.HeLa는화CHO는세포 (그림 6）。투과광의 총세포계수와 세포핵계수는 통계학적 차이가 없고,표명TL세포 분할 알고리즘의 정확성 (그림 7）。세포 계수를 제외하고,TL세포 분할 알고리즘은 여러 개를 생성할 수 있다데이터세포 반응과세포형태의 다른 특징 (그림 5）。예를 들어, 세포 및 세포 내에서 생성 가능목표물의 총 및 평균 수, 면적, 강도, 모양, 높이、폭 및 다양한기타다른 독수.사용필터 옵션둘러싸인 죽은 세포를 제거하면 더 나아갈 수 있다최적화이프로세스 및 감소적다살아있는 세포나 전세포를 이용한 염색의 필요성.이 밖에 세포핵 염색과 계수세포확인코끼리알고리즘의 사용은 분석을 통해 투과광 이미지를 만들 수 있음을 보여준다。

그림 2. ~을TL선택된 에 세포 분할 알고리즘 적용HeLa는세포 투과광 영상.사용자 정의 모듈 편집기에서 다음을 수행할 수 있습니다.로통과설정소스 파장 및 대표 세포 유형 쌍 선택TL세포 분할 알고리즘을 구성합니다.세포알고리즘A가로효과적으로이미지 인식의HeLa는화CHO는세포.

그림3. TL세포 분할 중첩 및필터 설정 필터링 후중첩된 비교 이미지. 최소 영역설정150 μm2로걸러내다死세포。

그림 4. 사용세포 대조코끼리분할모듈 쌍형광 세포 핵 영상진행계수.세포 핵에 따라 세포를 정량하고,시키다사용Hoechst 33342는대세포핵진행염색하다.로컬 배경 매개변수를 초과하는 최소 및 최대 너비 평가 및 강도를 최적화하여 정확성 보장인식모든가늘다포핵.가늘다포핵은 파란색 (왼쪽 사진) 분석숨기기노란색 (오른쪽 사진) 입니다.

그림5. 헤라세포의 대표적인 이미지,설정사용자 정의 모듈 이미지 분석방법。 파란색숨기기대표 통과TL세포 분할 알고리즘 사용TL여과기가리다필터링발견된 세포, 노란색은 계수 대조를 통해코끼리알고리즘이 발견한 세포핵.사용자 정의 모듈에 필요한 측정 항목은 측정 탭에서 수행할 수 있습니다.설정。필요측정할 객체정의위가능통과TL세포분할알고리즘숨겨진 객체, 카운트 체크를 선택합니다.코끼리가리다은폐각 측정목표물의 특성입니다.

그림6. 헤라화CHO는세포의 이미지 및적용TL세포 분할 사용자 정의 모듈최적화 후의 이미지 분석결과。청색 형광세포핵은 파란색으로 나타난다(왼쪽)，이미지분석중마스크노란색(오른쪽), 빛의 세포를 투과하여라이트 블루 마스크. 통과10x 플로어 계획물경이 있다ImageXpress는마이크로시스템에서 이미지를 캡처하고 새TL세포 분할 알고리즘 구성의 사용자 정의 모듈은 이미지를 분석합니다.

그림 7. 기반TL세포분할과 핵계객체 수모듈 비교HeLa는화CHO는세포의 총 세포 계수. 누르기1：2의 비율로 세포를 희석시켜 구멍마다20，000개 세포의 농도가 시작되다.

결론

MetaXpress는사용자 정의 모듈 편집기의TL세포 분할 알고리즘 가능로다양한 세포 유형과 크기를 효과적으로 정량하고 분석한다.ImageXpress는®마이크로 공초점회전판 공초점 고내포 영상 분석 시스템이 지원하는 최적화 분할 기능은 형광단과 무관한세포형태학.투과광 이미지 정량 세포 사용가능연구자의 검사 능력을 더욱 유연하게 하다.이적용 지침묘사하는 방법이 나왔어요.TL세포 분할 알고리즘은 증식, 세포 독성 연구 및 전염을 포함하되 이에 국한되지 않는 다양한 검사에 사용할 수 있습니다.