1、용도:

면역친화주는 한약재 시료액 중 테라마이신 A를 선택적으로 흡착해 시료에 매우 목적성 있는 순화 작용을 하며, 과주 정화 후 시료액은 HPLC 분석 또는 질소 복용 후 LC-MS/MS 검사에 직접 사용할 수 있다.

2、개요:

오트라톡신A (OhratoxinA, OTA) 는 오트라톡신과 페니실린속의 일부 균종에서 산생된 유독대사물로서 강한 신장독과 간장독을 가진 진균독소로서 기형을 일으키고 돌연변이를 일으키며 발암작용을 한다.

3、원리:

측정의 기초는 항원, 항체 반응으로 항체가 기둥 안에 연결되며, 시료는 추출, 여과를 거친 후 테라마이신 A 면역친화주를 천천히 통과하여 면역친화주 내 독소와 항체가 결합하고, 이후 면역친화주를 세탁하여 결합되지 않은 기타 무관한 물질을 제거한다.메탄올로 테라코마이신 A를 씻어내고 분석기기에 주입해 검사에 사용한다.

4、패키지 구성:

각 박스에는 각종 규격의 크레아플라톡신 A 면역 친화주 및 설명서 1부가 포함되어 있다.

5、필요한 재료는 카트리지에 제공되지 않습니다.

5.1 설비 및 소모품

--- HPLC/LC-MS/MS

-- 가스 제어 조작대

-- 공기 펌프

-- 천평

-- 고속 균질기(회전 속도≥10000/min) 또는 로터

분쇄기

-- 샘플별 체

-- 체커: 100mL/10mL

-- 주사기: 20mL

-- 이액기 또는 이액관: 1mL

-- 균질컵(또는 250mL 마개 원추형 병)

샘플병

병을 재다

5.2 시약

-- 메탄올(CH₃OH): 추출 과정용 분석 순수/세척 과정용 크로마토그래피 순수

-- 염화나트륨(NaCl): 순수 분석

-- 염산(HCl): 순수 분석

-- 수산화나트륨(NaOH): 순수 분석

-- 인산수소나트륨(NaH)₂PO는₄): 순수 분석

-- 인산이수소칼륨(KH₂PO는₄): 순수 분석

-- -- KCl: 순수 분석

----토온-20(C₅₈H₁₁₄O는₂₆): 순수 분석

-- -- 물(H₂O): 증류수 또는 이온 제거

6、참고 사항:

-- 사용 전 면역친화주는 실온(22∼25도)으로 돌아가야 한다.

-- 친화주 2~8 ℃ 저장, 동결 보관 불가.

-- 유효 기간 동안 면역 친화 기둥을 사용해달라.

-- 친화기둥 내 액체를 비우고 다시 샘플링 작업을 해야 한다.

-- 샘플링량: 필요에 따라 샘플링량을 적당히 늘리거나 줄일 수 있으며, 추출액량은 상응하게 변경해야 한다는 점에 유의한다.

-- 기둥용량: 기둥용량은 200ng으로 시료에서 검사할 독소의 함량을 희석배수로 나누어 기둥용량보다 높을 경우 상체액의 부피를 적당히 낮추고 재검사해야 한다.

-- pH: 친화 기둥의 상부 용액 pH는 6~8 사이여야 하는데, 이 범위를 벗어나면 염산 또는 수산화나트륨으로 pH를 조절해야 한다.

-- 온라인 검사 시 용매와 흐름이 일치하면 용매 효과의 영향을 제거할 수 있다.

-- 테라코마이신은 암을 유발할 수 있으므로 장갑과 마스크 등 보호도구를 착용하고 조작해야 한다.

-- 사용한 용기 및 표준품 용액은 차아염소산나트륨 용액(5%V/V)에 담가 밤을 보냈다.

7、시액의 조제:

7.1 추출액

70% 메탄올-수용액 (V 메탄올: V 물 = 70:30): 메탄올 700mL를 채취하여 이온제거수를 1L까지 정용한다.

7.2 인산염 완충용액 (약칭: PBS)

염화나트륨 8.00g, 인산수소나트륨 1.20g(또는 12수인산수소나트륨 2.92g), 인산이수소칼륨 0.20g, KCL 0.20g을 취하여 900mL의 물로 용해하고 염산으로 PH를 7.0±0.1로 조절하며 물을 가하여 1000mL로 희석한다.

7.3 인산염 토온 완충액 (약칭: PBST)

토온-20 1mL를 취하고 PBS 완충액은 1000mL로 희석한다.

8、샘플 처리：

-- 3g±0.01g 시료(고체 시료는 분쇄해야 하고 2mm 분사체를 통과해야 함), 염화나트륨 3g은 균질병에 60mL의 추출액을 첨가한다(7.1 참조).

-- 고속 균질(≥10000r/min) 2min;

-- 원심분리 10min(8000r/min),

-- 상청액 5mL를 채취해 50mL 체량병에 넣고 PBS 완충액을 눈금까지 희석해 섞어 원심분리 15min(8000r/min);

-- 상청액 20mL를 채취해 면역친화주 정화를 거쳤다.

희석 배수: 10

9、운영 체제:

9.1 이전

-- 면역친화기둥을 꺼내 주사기통의 하단을 친화기둥에 직접 관통시킨다

네모난 마개는 주사기통과 친화기둥의 련결을 완성하고 이를 가스제어조작대에 배치하여 고정시킨다.

-- 친화 기둥 내 액체를 배공한 후 단계 8에서 샘플을 채취해 주사기 통에 주입한다.

-- 액체를 1∼2방울/s의 속도로 유출시킨다.

9.2 세탁

-- 액체가 마르기를 기다린다.

-- 면역친화주를 10mLPBST 완충액(7.3 참조), 물 10mL로 순차적으로 림세해 유속 2∼3방울/s.

9.3 세탁

-- 액체가 마르기를 기다린 후 바늘통을 제거하고 친화기둥의 액체를 드라이하여 1.5mL의 메탄올로 씻어내고 2mL의 세척액을 수집하여 샘플병에 넣고 물로 눈금까지 희석하여 고루 섞는다.

-- HPLC 분석을 위해 0.22μm 마이크로필터로 여과한 뒤 시료병으로 옮겼다.

* 매번 샘플링하기 전에 지난번 액체를 말려야 한다.

10、결과 판독:

크레아플라톡신 A 함유량 = 검출농도 × 희석배수

11、저장 조건 및 유효기간：

저장 조건: 2~8 ℃.

유효 기간: 이 제품의 유효 기간은 18개월입니다.