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illumina NextSeq 500/550 v2.5 시퀀싱 키트

협상 가능업데이트05/06
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개요

제품 이름: illumina NextSeq 500/550 v2.5 시퀀싱 키트(150 cycles) 현물 공급 $r$n 제품 번호: 20024904$r$n 제품 브랜드: illumina/미국 인미나

제품 정보

제품 이름:illumina NextSeq 500/550 v2.5 시퀀싱 키트(150 cycles) 현물 공급

상품번호: 20024904

제품 브랜드: illumina/미국 Inmena



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llumina 2세대 시퀀싱 기술로 합성하면서 시퀀싱(SBS)하는 차세대 시퀀싱(NGS) 기술로 세계 90% 이상의 시퀀싱 데이터 생성을 담당한다.

일루미나의 2세대 시퀀싱 기술을 합성하면서 시퀀싱(Sequencing-by-Synthesis, 약칭 SBS)이라고 한다.SBS는 염기 연장, 형광 자극 및 신호 수집, 절단 등 3단계를 주로 한다.이 세 단계를 반복하여 반복할 수 있습니다.순환할 때마다 염기를 측정한다.염기 (즉 읽기 길이) 를 측정하고 싶은 만큼 순환한다.시퀀스 주기 횟수는 소프트웨어에서 설정할 수 있습니다.시퀀스가 얼마나 적당한지는 프로젝트의 성격과 수요에 따라 결정해야 한다.대부분의 경우 SR 실험(단일 시퀀싱)은 1x50개의 염기를, PE 실험(듀얼 시퀀싱)은 2x150개의 염기를 측정한다.

1 염기 확장

Illumina 시퀀싱 시약에 사용되는 dNTP의 특징은 동시에 두 개의 수식 기단을 가지고 있다: 하나의 형광 기단, 하나의 가역 종지 기단.A, G, C, T 4가지 염기는 각각 4가지 부동한 형광기단을 표시하는데 그들은 부동한 파장의 레이자격발하에 부동한 파장 (즉 색갈) 의 형광을 발사할수 있다.형광색은 염기 종류와 일일이 대응하기 때문에 빛을 자극하는 파장에 따라 염기를 식별할 수 있다.네 가지 염기의 종지 기단은 같다.종지 기단의 존재로 인해 모든 dNTP는 반응 시간이 아무리 길어도 매번 1개의 염기만 연장할 수 있다.또한 이 종지기단은 가역적이기 때문에 형광신호가 수집된 후 절단제로 이 종지기단을 제거하여 염기를 자연적인 연장가능한 상태로 회복시킬 수 있으며, 이때 다음 순환을 계속하여 염기를 다시 측정할 수 있다.

가역 종지 기단 기술은 Illumina 2세대 서열 분석의 큰 특색이다.브리지 PCR 기술과 함께 Illumina 2세대 시퀀싱의 두 기둥을 구성하여 고품질의 시퀀싱 데이터를 안정적으로 얻을 수 있는 튼튼한 기초를 닦았다.

2 신호 수집

HiSeq 시리즈 시퀀싱에는 빨간색과 녹색의 두 개의 레이저 튜브와 두 개의 필터가 있습니다.그들 두 가지를 조합하면 4가지 다른 자극 파장을 형성할 수 있는데, 마침 각각 A, G, C, T 4가지 염기를 자극하는 데 사용된다.

Cluster에 표시된 형광 기단이 레이저 자극으로 생성된 신호는 카메라로 촬영하거나 스캔하는 방식으로 신호를 수집할 수 있다.스캔 기술은 X10 시리즈에 채택될 정도로 속도가 빠르다.FC는 면적이 비교적 넓고 상면과 하면은 각각 사진을 찍어야 하기 때문에 사진 촬영 과정이 상당히 오래 걸린다.고전적인 HiSeq 2000의 경우, 한 번의 시퀀싱 순환으로 발생하는 형광 신호는 사진을 찍어 수집하는 데 약 40분이 걸리며, 시퀀싱 반응 자체보다 더 오래 걸린다.

3 잘라내기

형광 신호 수집이 끝나면 레이저를 끄고 시퀀싱 유인물의 연장 산물에 있는 염기에 표시된 형광 기단과 종료 기단을 절단제로 제거한다.두 개의 수식 기단이 모두 절제되어 한편으로는 형광을 방해하는 것을 없애고, 한편으로는 체인 끝의 염기를 자연적인 확장 가능한 상태로 회복시켜 다음 시퀀싱을 준비한다.

다시 합성, 자극, 수집 등의 절차를 반복하면 두 번째 염기의 서열을 측정할 수 있다.

시퀀스 주기는 여러 번 반복할 수 있습니다.신호 잡음비가 낮아져 염기 신호를 효과적으로 식별할 수 없을 때까지 이론적으로 계속 반복할 수 있다.형광 기단의 발광 효율이 지속적으로 감소하고 Taq 효소의 활성도 지속적으로 감소하기 때문에 실제로 서열 분석 순환 횟수는 제한적이며 큰 반복 횟수는 sbs 시약의 처방과 관련이 있습니다.시퀀스의 순환 횟수는 소프트웨어 설정 과정에서 인위적일 수 있으며, 이 반복 횟수는 각 시퀀스 세션의 읽기 길이이다.현재 Illumina 플랫폼의 읽기 길이는 2x100bp, 2x125bp, 2x150bp, 2x300bp 등 다양하며 이 중 2x150bp는 비교적 광범위하게 사용된다.

단일 시퀀싱: 단일 시퀀싱 (Single-read) 은 먼저 DNA 샘플을 단편화 처리하여 200-500bp의 세그먼트를 형성하고, 유인물 서열을 DNA 세그먼트의 한쪽 끝에 연결한 다음 끝에 이음매를 추가하여 세그먼트를 flow cell에 고정하여 DNA 클러스터를 생성하고, 온라인 시퀀싱 단일 읽기 서열을 측정한다.

양단 시퀀싱: 양단 시퀀싱(Paired-end) 방법은 측정 대기 DNA 라이브러리를 구축할 때 양단 이음매에 시퀀싱 유인물 결합 비트를 추가하여 * 라운드 시퀀싱이 완료되면 * 라운드 시퀀싱의 템플릿 체인을 제거하고 대독 시퀀싱 모듈(Paired-End Module) 로 상호 보완 체인이 원래 위치에서 재생되고 확대되도록 유도하여 2차 시퀀싱 템플릿을 합성하여 2차 시퀀싱의 2차 시퀀싱 템플릿에 사용합니다.

게놈문고는 어떤 생물의 모든 게놈 DNA를 일정한 길이의 DNA 조각으로 절단하여 어떤 운반체에 복제하여 형성된 집합을 말한다.게놈 문고는 DNA 출처에 따라 핵게놈 문고, 엽록체 게놈 문고 및 미토콘드리아 게놈 문고로 나뉜다.게놈 라이브러리 구축 시 유전 정보 공급체는 게놈 DNA이기 때문에 발육 시기 및 조직 기관 특이성이 없으며, 하나의 * 게놈 라이브러리에는 게놈 DNA상의 모든 코딩 영역 및 비코딩 영역 서열의 복제가 포함되어 있다;생물유기체의 모든 유전자는 문고에서 그 복제가 있는데 이 복제의 유전자세그먼트에는 간격서렬이 포함되여있기에 게놈문고는 게놈의 모든 구조정보를 진실하게 나타낼수 있다.

게놈 라이브러리 (Genomic Library) 정의: 어떤 생물 게놈의 모든 유전 정보를 복제 캐리어를 통해 수용체균 복제 하위 그룹에 저장하는데, 이 그룹은 바로 이 생물의 게놈 라이브러리이다.


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제품명: illumina 20024904 NextSeq 500/550 v2.5 시퀀싱 키트(150 cycles)

상품번호: 20024904

제품 브랜드: illumina/미국 Inmena

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