(실험 서비스) 실시간 형광 정량 PCR

1. 서비스 개요

(실험 서비스) 실시간 형광 정량 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)은 PCR 증폭반응체계에 형광기단을 넣어 형광신호 축적을 이용해 전체 PCR 프로세스를 실시간으로 모니터링하고, 마지막으로 표준 곡선을 통해 미지의 템플릿을 정량적으로 분석하는 방법을 말한다.분자생물학 연구에서의"금표준"기술로서 qPCR은 그 민감도, 특이성과 정확성을 바탕으로 이미 유전자표현분석, 병원체검사 및 유전변이연구의 도구로 되였다.

PCR 검사 플랫폼을 통해 다음을 제공합니다.샘플 핵산 추출, 역전록, qPCR에서 데이터 분석으로 확대원스톱 기술 서비스.mRNA, miRNA, lncRNA의 발현 수준을 검사해야 하든, DNA 복사수 변이 (CNV) 분석을 해야 하든, 우리는 당신에게 표준에 맞는 고품질 데이터를 제공할 수 있습니다.

2. 기술 원리와 방법

우리는 두 가지 주요 테스트 전략을 제공하여 다양한 실험 요구를 충족시킵니다.

• SYBR Green I 염색약:

• 원리:SYBR Green I 염료는 이중 체인 DNA의 작은 도랑을 특이적으로 결합 할 수 있으며 결합 후 형광 신호가 강화됩니다.PCR 산물이 증가함에 따라 형광 신호는 동시에 강화됩니다.

• 적용 대상:유전자 발현 차이 초기 선별, 대규모 샘플 검사, 비용 민감형 프로젝트.우리는 용해 곡선 (Melt Curve) 분석과 함께 증폭 산물의 단일성을 확보합니다.

• TaqMan 프로브:

• 원리:표적 시퀀스에 맞게 설계된 특이성 프로브 (5'단 표기 형광 보고 기단, 3'단 표기 담금질 기단) 를 이용한다.탐침은 완전할 때 형광이 없으며 증폭과정에서 Taq효소의 수해작용은 형광기단을 분리하여 형광을 발산한다.

• 적용 대상:고특이성은 실험, 다중 PCR 검사(Multiplex PCR), SNP 파팅, 미량 샘플 검사를 요구한다.

3. 서비스 내용 및 전체 절차

표준화된 운영 절차(SOP)를 엄격히 준수하여 각 단계를 정확하게 제어할 수 있도록 합니다.

단계 1: 실험 설계와 최적화

• 유인물 / 프로브 설계:목적 유전자 (Target Gene) 에 대해 게놈 DNA 오염 방해를 피하기 위해 내포된 하위 유인물을 설계합니다.GAPDH, ACTB, 18S rRNA 등과 같은 내삼 유전자(Housekeeping Gene)를 필터링합니다.

• 사전 실험 검증:일반 PCR 및 글리세린 겔 전영을 통해 유인물 특이성을 검증하고 퇴화 온도를 최적화한다.

2단계: 샘플 처리

• 핵산 추출:샘플 유형(세포, 조직, 혈액, 외비체 등)별로 전용 키트로 고품질의 총 RNA나 DNA를 추출해 농도·순도(OD260/280) 검사 및 완결성 평가를 한다.

• 역전록(cDNA 합성):mRNA에 대해 Oligo(dT) 또는 임의 유인물을 사용합니다.miRNA에 대해 줄기 고리 유인물 또는 가미법을 사용하여 반전록 효율을 균일하게 보장합니다.

3단계: 온라인 테스트

• 시스템 구축:하이파이 qPCR 반응 체계를 구성하고 최소 3개의 기술 중복(Triplicates)을 설정하여 샘플링 오차를 제거한다.

• 프로그램 실행:실시간으로 형광 신호를 채집하여 증폭 곡선을 생성한다.

4단계: 데이터 분석

• 상대 정량:채용2−ΔΔCt는법 계산 실험군은 대조군에 비해 유전자 발현 차이가 fold change이다.

  
  

• 정량:입자 표준품을 구축하고, 표준 곡선을 그리며, 샘플의 목적 유전자의 정확한 복사 수를 계산한다.

  
  

4.우리의 핵심 이점

1. 하드웨어 플랫폼:메인스트림 정량 PCR 기기는 구멍 간 차이가 매우 적고 데이터 안정성이 높습니다.

2. 엄격한 품질 관리 시스템:국제를 따르다MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）안내서.증폭 효율(90~110%)과 선형 관계(R²>0.99)를 엄격히 모니터링하여 가짜 양성/가짜 음성을 근절한다.

3. 복잡한 샘플 처리:FFPE 절편, 미량 조직, 외비체 및 전혈 샘플 처리 경험이 풍부하여 PCR 억제제를 효과적으로 제거합니다.

4. 전문 데이터 제공:원본 Ct 값뿐만 아니라 증폭 그래프, 용해 그래프, 상대 표현량 주상도/열도를 제공하며, 상세한 실험 재료와 방법을 포함하는 완전한 보고서를 생성하여 SCI 발표 요구를 직접 만족시킨다.

5. 장면 적용

• 유전자 발현 수준 분석:mRNA, lncRNA, circRNA의 다른 처리 조건 또는 질병 모델에서의 차이 발현 검증(RNA-seq 이후의 qPCR 검증).

• miRNA 검사:미세 RNA의 발현 조절 연구.

• DNA 복제본 변이(CNV):종양 유전자 증폭 또는 결핍 검사, 유전자 변형 복사수 감정.

• SNP 파팅 유효성 검사:뉴클레오티드 다태성 위치의 유전자형 검사.

• 병원성 미생물 검사:바이러스 적재량 측정, 세균 정성 정량 분석.

• ChIP-qPCR:염색질 면역 침전 후의 DNA 조각이 풍부하게 검증되어 단백질-DNA 상호작용을 연구한다.

6. 샘플링 요구 사항 및 제공 기준

• 샘플 제안:

• 세포: 세포 침전 >

• 1*10^6，PBS 세척 후 냉동.

• 조직:동물 조직 > 50mg, 식물 조직 > 100mg, 액체 질소 냉동 또는 RNAlater 보존

• 혈액:전혈은 항응고 처리를 하거나 분리된 혈청/혈장을 직접 제공해야 한다.

• RNA 및 DNA:농도 > 50ng/μL, 총량 > 1μg, 드라이아이스 운송.

• 제공 내용:전체 실험 보고서 (실험 단계, 시약 정보 포함), 원본 데이터 파일 (.eds/.xls), 데이터 분석 결과 차트 (Excel 통계표 및 HD 사진)