다람쥐 멜라토닌(MT) ELISA 키트

다람쥐 멜라토닌(MT) ELISA 키트

l본 시약함은 체외 정량 검측에 사용된다혈청, 혈장, 조직 균장 및 관련 액체 샘플중다람쥐 멜라토닌（MT는)의 함량입니다.

l유효기간: 6개월

l저장 기준:2-8℃

l본 시약 상자는 과학 연구에만 사용되며, 임상 진단에 사용할 수 없습니다.

실험 원리

시약함은 이중항체 1단계 협심법 효소연면역흡착시험(ELISA)을 사용한다.다람쥐 멜라토닌(MT)에 포획된 항체를 미리 싼 가방의 미세 구멍에 표본, 표준품, HRP 표시된 검사 항체를 차례로 넣어 온육하고 *세탁한다.바탕물인 TMB로 발색하면 TMB는 과산화물 효소의 촉매로 파란색으로 바뀌고 산의 작용으로 종황색으로 바뀐다.색상의 깊이는 샘플의 쥐 멜라토닌(MT)과 상관관계가 있다.효소표시기로 450nm 파장에서 흡광도(OD값)를 측정해 시료 농도를 계산한다.

샘플 처리 및 요구 사항

1. 혈청：혈청분리관에 수집된 전혈표본을 실온에 2시간 또는 4 ℃ 에 놓고 밤을 보낸 다음 1000 × g 원심분리 20분, 채취하면 된다. 또는 상청을 -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 놓고 보존하지만 반복적으로 얼어붙는 것을 피해야 한다.
2. 혈장：EDTA 또는 헤파린을 항응고제로 표본을 채취하고 표본을 채취 후 30분 동안 2-8 ℃ 1000 × g에서 15분간 원심분리하여 채취하면 검사할 수 있거나 상청을 -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 보관하되 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.
3. 균일한 풀을 조직한다:미리 차가운 PBS(0.01M, pH=7.4)로 조직을 씻어 잔류 혈액(균장에서 분해된 적혈구는 측정 결과에 영향을 미친다)을 제거하고 무게를 잰 뒤 조직을 잘랐다.잘게 자른 조직과 해당 부피의 PBS (일반적으로 1: 9의 무게 부피비, 예를 들어 1g의 조직 샘플은 9mL의 PBS에 해당하며, 구체적인 부피는 실험 수요에 따라 적절히 조정하고 기록할 수 있다.PBS에 프로테아제 억제제를 첨가하는 것을 추천합니다) 유리 균장기에 넣어 얼음에 충분히 연마합니다.조직세포를 더 분해하기 위해 균장액을 초음파 파쇄하거나 동결을 반복할 수 있다.후에 균장액을 5000×g에서 5~10분 동안 원심분리하여 맑은 것을 취하여 검사한다.

4.세포배양물 상청 또는 기타 생물표본:1000 × g 원심분리 20분 동안 제거하여 검사하거나 상청을 -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 보관하되 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.

주: 표본의 용혈은 후 검사 결과에 영향을 줄 수 있기 때문에 용혈 표본은 이 검사를 진행하는 것이 적합하지 않다.

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비

• 효소 측정기 (450nm)

• 고정밀 샘플링 및 총 헤드: 0.5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

• 37 ℃ 항온상자

• 증류수 또는 이온제거수

시약함 구성

다람쥐 멜라토닌(MT) ELISA 키트비주：

1. 표준품 농도: 80, 40, 20, 10, 5, 2.5pg/mL

2.대량의 정상 표본 검사를 거쳐, 표본의 정상 농도 값은 모두 시약함이 제공하는 검측 범위 내에 있으며, 실험 과정에서 직접 50 μL 샘플의 샘플을 채취하면 된다.일부 샘플 값이 zui 대 표준품 농도를 초과할 경우, 샘플 희석액으로 표본을 적당히 희석한 후 다시 실험할 수 있다.

주의사항

• 정확한 결과를 보장하기 위해 규정된 시간과 온도에 따라 온육을 엄격히 진행한다.모든 시약은 반드시 사용하기 전에 실온 20-25 ℃ 에 도달해야 한다.사용 즉시 시약을 냉장 보관한다.

• 세판이 정확하지 않으면 부정확한 결과를 초래할 수 있다.베이스를 넣기 전에 구멍 안의 액체를 최대한 빨아들여야 한다.온육 과정에서 미세한 구멍이 마르지 않도록 해야 한다.

• 판자에 남아 있는 액체와 손가락 자국을 제거하십시오. 그렇지 않으면 OD값에 영향을 줍니다.

• 베이스 발색액은 무색 또는 매우 연한 색상이어야 하며, 이미 파랗게 변한 베이스는 사용할 수 없다.

• 시약과 표본의 교차 오염을 피하여 잘못된 결과를 초래하지 않도록 하다.

• 저장과 온육 시 강한 빛이 직접 비치는 것을 피한다.

• 실온으로 균형을 맞춘 후 물방울이 냉판에 응집되지 않도록 밀봉봉투를 열어라.

• 어떠한 반응 시약도 표백 용제나 표백 용제가 발산하는 강렬한 기체에 접촉할 수 없다.어떤 표백 성분도 시약함의 반응 시약의 생물 활성을 파괴할 수 있다.

• 만료된 제품은 사용할 수 없습니다.

• 질병을 전파할 수 있다면 모든 시료를 잘 관리하고 정해진 절차에 따라 시료와 검측 장치를 처리해야 한다.

시약 준비

시약함은 냉장 환경에서 꺼내면 실온 균형이 맞아야 사용할 수 있다.

20×세척 완충액의 희석: 증류수는 1:20으로 희석한다. 즉 20×세척 완충액 1개에 증류수 19개를 더한다.

작업 단계

1. 실온 균형 20min 후의 알루미늄 포일 주머니에서 필요한 판자를 꺼내고, 나머지 판자는 자봉 주머니로 밀봉하여 4 ℃ 로 되돌려 놓는다.

2. 표준품공과 견본공을 설치하고 표준품공에 각각 다른 농도를 더한 표준품 50μL;

3. 샘플 구멍에 측정 대기 샘플 50 μL를 넣습니다.빈 구멍을 넣지 않습니다.

4. 빈 구멍 외에 표준품 구멍과 샘플 구멍에 매운 뿌리 과산화물 효소(HRP) 표시를 한 검출 항체 100μL를 구멍마다 넣어 봉판막으로 반응 구멍을 막고, 37℃ 수욕솥이나 항온상자 온도 60min을 키운다.

5. 액체를 버리고 흡수지에 두드려 말리고, 구멍마다 세척액(350μL)을 가득 채우고, 1min 정치하고, 세척액을 뿌리고, 흡수지에 두드려 말리고, 이렇게 세판을 5회 반복한다(세판기 세척판도 사용 가능).

6. 구멍마다 바탕물 A, B를 각각 50μL씩 넣고 37℃에서 빛을 피해 15min 부화한다.

7. 구멍당 종료액 50μL를 넣고 15min 이내에 450nm 파장에서 구멍별 OD값을 측정한다.

실험 결과 계산

측정된 표준품의 OD값을 가로, 표준품의 농도값을 세로좌표로 하여 좌표지에 또는 관련 소프트웨어로 표준곡선을 그리고 직선회귀방정식을 얻어 견본의 OD값을 방정식에 대입하여 견본의 농도를 계산한다.

시약함 성능

• 검사 범위: 2.5pg/mL – 80pg/mL.

• 감도: 낮은 검출 농도는 0.1 pg/mL 미만입니다.

• 특이성: 다른 가용성 구조의 유사물과 교차 반응하지 않는다.

• 반복성: 판내 변이계수는 10% 미만, 판간 변이계수는 15% 미만.

설명

기존 조건 및 과학기술 수준이 아직 모든 공급업체가 제공한 모든 원료에 대해 전면적인 감정과 분석을 진행할 수 없기 때문에 본 제품은 일정한 품질 기술 위험이 존재할 수 있습니다.

• 최종 실험 결과는 시약의 유효성, 실험자의 관련 조작 및 당시의 실험 환경과 밀접한 관련이 있으므로 반드시 충분한 표본 백업을 준비하십시오.

• 차수에 따라 동일한 제품은 약간의 차이가 있을 수 있습니다. 예를 들면: 검측 제한, 민감도 및 발색 시간 등은 시약함 내 설명서에 근거하여 실험 조작을 진행하시기 바랍니다. 사이트 전자판 설명서는 참고만 합니다.

• 본 시약함 부대시약을 전부 사용해야만 검측효과를 보장할수 있으며 기타 상인의 제품을 혼용해서는 안된다.이 키트의 실험 지침을 철저히 준수해야만 *의 검사 결과를 얻을 수 있습니다.

• 당사는 시약함 자체에 대해서만 책임을 지고 이 시약함 사용으로 인한 샘플 소모에 대해서는 책임을 지지 않습니다. 사용자는 사용하기 전에 샘플의 가능한 사용량을 충분히 고려하여 충분한 샘플을 남겨 두시기 바랍니다.

• 화학 분해액을 사용하여 제조된 조직 균장 또는 세포 추출액은 특정 화학 물질의 도입으로 인해 ELISA 실험 결과의 편차가 발생할 수 있습니다.

• 만약 견본이 세포배양상청이라면 이런 류형의 견본은 교란요소가 비교적 많은데 례를 들면 세포상태, 세포수량, 표본추출시간 등이므로 검출되지 않는 상황이 존재할수 있다.

• 원핵 및 진핵 재조합 단백질을 포함한 일부 천연 단백질 또는 재조합 단백질은 본 제품에 사용되는 검사 항체 및 포획 항체와 일치하지 않기 때문에 검출되지 않을 수 있습니다.