PK-59(인간 췌장암세포)

PK-59(인간 췌장암세포)

2. 세포 접수 후의 처리

1) 세포를 접수한후 75% 의 알콜소독병벽은 T25병을 실온에 약 1h 배치하는데 만약 배양병이 파손되고 액체가 넘치고 세포에 오염이 있는것을 발견하면 사진을 찍은후 제때에 우리에게 련락하기 바란다.

2) 4 또는 5X 현미경으로 세포 상태를 확인하고, 동시에 방금 받은 세포에 사진 (10 ×, 20 ×) 각 2-3장 및 배양병 외관 사진 1장을 남겨 판매 후 받았을 때 세포 상태의 근거로 삼으십시오.

3) 밀착 세포:세포는 실온에서 1h를 두고 현미경으로 세포의 성장과 밀착 상황을 관찰하는데, 일부 밀착 세포는 택배 운송 과정에서 진동으로 탈락하고 탈락한 후 뭉치는 경우도 있다.거울로 세포의 생장밀도가 60% 이하인 것을 관찰하면 배양병의 관액배지 (벽에 붙지 않은 세포가 원심회수가 필요하다면 원배지병에 다시 걸어넣는다) 를 제거하고 새로 조제된 놀이전배지 6-8mL를 첨가하여 세포배지함에 넣어 계속 배양할 수 있다.세포의 성장밀도가 70~80% 이상이면 세포를 대물림할 수 있다.전대 과정에서 운송 진동으로 탈락한 세포는 원심 회수가 필요하다.

4) 세포 운송 중 탈락 조작 방법: 탈락한 세포를 수집하여 원심을 제거한 후 폐기하고, PBS로 한 번 세척하고, 원심을 폐기하고, 원심관에 이효소 1ml를 첨가하여 20초 정도 분산시키고, 전배지를 추가하여 소화를 종료한 후 원심을 다시 펴고, 나머지 밀착세포는 정상적인 밀착세포 전대 방법에 따라 조작한다.

5)비고: 운송용 배지 (관액배지) 는 더 이상 세포를 배양하는 데 사용할 수 없습니다. 설명서 세포배지 조건에 따라 새로 배합한 완전배지로 바꾸어 세포를 배양하십시오.세포를 받은 후 첫 번째 전대는 T25 배양병 1: 2 전대를 권장한다.

셋, 가늘다포배양 조작

1) 소생세포: 다음과 같은 세포배양 동존처리는 참고용으로만 제공되며 구체적인 조작절차는 수납제품설명서를 위주로 한다

세포현액 1mL를 함유한 동존관을 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고 배지 4mL를 더해 골고루 섞는다.1000rpm 조건에서 원심분리 3min, 상청액을 버리고 배지 1~2mL를 첨가한 후 고루 분다.그리고 모든 세포현액을 적당량의 배양기를 함유한 배양병에 넣어 밤을 새운다(또는 세포현액을 6cm그릇에 넣고 약 4mL를 넣어 전배양기를 가지고 놀며 밤을 새운다).셋째 날 환액하고 세포밀도를 검사한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

a) 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤세한다.

b) 소화액 1mL(0.25% Trypsin-0.02"TA)를 배양병에 넣어 소화액을 모든 세포에 적셔 37℃ 배양함에 넣어 1-3min(세포 소화 상태에 따라 다름)을 소화시킨 후 현미경으로 세포 소화 상태를 관찰한 후 세포가 대부분 둥글게 변하고 탈락하면 신속하게 조작대로 가져가 배양병을 몇 번 두드린 후 2-3ml를 넣어 배양기 소화를 종료한다.

c) 가볍게 두드린 후 무균 원심관에 넣고 1000rpm 원심분리 5min, 상청액을 버리고 1~2mL 배양액을 보충한 후 고루 분다.

d) 세포현액을 1:2 비율로 배지 8mL를 함유한 새로운 그릇이나 병에 나누어 배지 상자에 넣어 배양한다.

밀착 세포 전대 주의점:

l PBS에서 꼭 세탁해주세요.

l세포는 몇 번 더 관찰하여 시간을 파악한다. 세포가 기본적으로 떨어지지 않고 소화를 중지한 후에 불어서 떨어뜨리지 마라. 이렇게 하면 세포가 더욱 쉽게 분화되고 죽게 된다.

l 세포를 계속 때리지 마라

3) 세포 동존: 세포의 생장 상태가 양호할 때 세포 동존을 진행할 수 있다.아래T25병을 예로 들면,

a) 세포 및 세포배양액을 수집하여 무균원심관에 넣고 1000rpm 조건에서 4min 원심분리하여 상청액을 버리고 PBS로 한번 세척하여 PBS를 버리고 세포계수를 진행한다.

b) 세포 수량에 따라 무혈청 세포 동존액을 첨가하여 세포 밀도를 1 × 10 ^ 6~1 × 10 ^ 7/mL로 가볍게 섞고, 각 동존관은 1mL의 세포 현액을 동존시키고, 동존관은 표시를 잘 하도록 주의한다.

c) 냉동 보관관을 -80 ℃ 냉장고에 넣고 24h 후에 액체 질소 관개 저장한다.다음에 받을 수 있도록 냉동 보관소의 위치를 기록하세요.

4. 배양 주의사항

1) 세포에 문제가 생기면 재발 상황

a) 세포 운송 도중에 부딪힌 각종 문제, 세포 분실, 병 몸 파손, 배양액 심각한 누액 등, 재발;

b) 세포 오염 문제는 제품을 받은 지 3일 이내에 우리에게 진실한 실험 결과를 제출하고, 확인 후 재발급해 주십시오;

c) 상온에서 출하된 세포가 2시간 동안 방치된 후, 드라이아이스 냉동 출하된 세포가 소생한 후 2일 후, 절대다수의 세포가 생존하지 않고 (진실하고 선명한 세포 상태 사진을 제공해야 함), 재발;

d) 드라이아이스 냉동 보관 출하된 세포가 소생한 후 2일 후 또는 상온에서 출하된 세포는 2시간 동안 방치되어 개봉되지 않아 오염이 발생하여 재발한다.

e) 세포 활성 문제는 제품을 받은 지 7일 이내에 우리에게 진실한 실험 결과를 제출하고, 대망람 염색법으로 세포 활력을 감정하고, 매일의 세포 사진을 확인하여 재발급해 주십시오;

f) 세포는 수령 당일 및 2, 3일째 사진을 찍으시고, 3일간 고지하지 않은 경우 제품에 합격한 것으로 간주합니다.4~7일 이내에 문제가 발생하면 세포 전 3일간의 사진과 세포에 문제가 발생한 사진 및 세포 관련 조작의 상세한 절차를 제공하고 기술자와 소통해야 하며 기술자가 우리측의 책임으로 판정한 경우 재발부한다.

2) 세포에 문제가 생겨 재발하지 않는 경우

a) 고객의 조작은 세포오염을 초래하여 재발하지 않는다;

b) 고객의 심각한 조작 실수로 세포 상태가 좋지 않고 재발하지 않는다;

c) 우리가 추천하지 않은 세포배양체계는 세포상태가 좋지 않고 재발하지 않는다.

d) 세포 상태가 좋지 않아 배양 전 3일간의 세포 상태 사진을 진실하고 선명하게 제공하지 않고 재발하지 않는다;

e) 세포를 배양할 때 기타 처리를 거쳐 세포에 문제가 발생한 경우, 재발하지 않는다;

f) 세포를 받고 문제를 발견하여 고객센터 직원과 소통하는 시간이 7일 이상인 경우 재발하지 않는다는 것을 증명한다.

g) 구체적인 상황에 따라 결정된다.

5. 주의사항

1.모든 동물 세포는 잠재적인 생물 위해성이 있는 것으로 간주하고, 반드시 2급 생물 안전대 내에서 조작해야 하며, 모든 폐액 및 이 세포에 접촉한 그릇은 멸균한 후에야 버릴 수 있도록 주의해 주십시오.

2. 동존세포를 소생시킬 때 항상 보호장갑, 옷, 보호마스크를 착용하는 것을 권장한다.주의: 냉동 보관관이 액체 질소에 담그면 누출되고 서서히 액체 질소로 가득 찰 수 있습니다.해동 시 액체 질소가 기상으로 전환되어 용기가 폭발하거나 위험력으로 뚜껑을 불어 떨어뜨려 날리는 부스러기가 발생하여 인명 피해를 줄 수 있다.

3. 이 세포는 과학 연구에만 사용됩니다!설명서는 참고용으로만 제공되며 실제 도착 설명서를 기준으로 합니다!