장기배양 키트(간암, 결장암, 신장암)

사용 방법

1. 원대
(1) 취재후의 조직은 반드시 예랭한 (2-8 °C) 조직보존액 E의 표본추출병에 넣고 재빨리 청정실험실로 이송하여 조직처리와 세포분리를 진행하고 사진을 찍고 정보를 등록해야 한다.
(2) 약간의 배양접시를 준비하고 4 ℃ 로 예냉된 원대배양완충액 B를 첨가하여 준비한다.
(3) 샘플링병을 소독하여 조직을 배양그릇에 넣고 원대배양완충액 B를 리용하여 세척한후 안과jian 또는 수술dao를 리용하여 조직jian을 체적이 약 1~3mm로 썰어야 한다3의 조직 블록입니다.
(4) 조직용인 유방암 원대조직 소화 yeC 소화, 37 ℃ 진탕 소화 10-20min, (소화 과정 중 수시로 소화 상황을 관찰).
(5) 소량의 액체를 취하여 현미경하에서 관찰하고 거울하에서 비교적 많은 단일세포 또는 70um 이하의 세포클러스터를 관찰한후 3배체적의 원대배양완충액 B를 첨가하여 소화를 중지한다.
(6) 100um 공경의 체망을 사용하여 여과하고, 여과액을 수집한 후 300g에 원심 5min을 부집한 후 상청으로 옮기고, 원대 배양 완충액 B를 첨가하여 다시 원심을 중량한다.
(7) 기질접착제 계산: 6단계 후 수집된 조직부피를 관찰하고 조직부피의 25배를 첨가하는 기질접착제(abs9495) 포장을 다시 걸다.
(8) 24공 세포배양판의 경우 매 구멍마다 접착제 25ul이 기질접착제 혼합물을 조직하여 판을 깔았다(4℃에서 조작).
(9) 깐 배양판을 37℃ 배양함에 10-15min 접착제로 넣고 사람 유방암류 장기배양기 A(실온회복)를 첨가해 배양한다.
2. 류기관전대배양
(1) 이액총은 배양기를 흡입하고 구멍마다 1-2ml 4 ℃ 류의 기관전대배양완충액 G를 첨가하여 2min 배치한다.
(2) 이액총은 가볍게 기질접착제를 불어 15ml의 원심관에 수집하고 4 ℃ 는 10min 정치한다.(6-8 구멍당 세트)
(3) a: 유기관의 수량이 부족하거나 부피가 시간보다 작다: 원심 5min은 상청을 버리고 적당량의 유기관 전대 배양 완충액 G를 첨가하여 1.5ml의 원심관으로 다시 옮기고 300g의 원심 5min은 액체를 버리고 4단계를 진행한다.
b: 장기의 수량이 비교적 많거나 부피가 비교적 클 때: 원심 5min은 상청을 버리고 적당량의 장기전대소화액 D를 첨가하여 2-3min을 소화하고, 장기전대배양완충액 G를 첨가하여 소화를 중지하고, 원심 5min은 혼합액을 버리고, 적당량의 장기전대배양완충액 G를 첨가하여 1.5ml의 원심관으로 다시 이동하고, 300g의 원심 5min은 액체를 버리고 4단계를 진행한다.
(4) 류기관을 수집한후 기질접착제를 첨가하여 중현시키고 매 구멍마다 25ul 기질접착제를 24공 세포배양판에 깔고 배양함에 10-15min을 배치하여 500ul인 유방암류기관배양기 A를 첨가한다.
3. 류기관 동존
(1) 이액총은 배양기를 흡입하고 구멍마다 1-2ml 4 ℃ 류의 기관전대배양완충액 G를 첨가하여 2min 배치한다.
(2) 이액총은 가볍게 기질접착제를 불어 15ml의 원심관에 수집하고 4 ℃ 는 10min 정치한다.(6-8 구멍당 세트)
(3) 원심5min은 상청을 버리고 적당량의 류기관전대배양완충액 G를 첨가하여 재차 중현시키고 300g의 원심5min은 액체를 버린다.
(4) 적당량의 류기관동존액 F를 첨가하고 부드럽게 불어 중현을 한다. 24공 세포배양판을 례로 들면 밀도는 2개공 동존 1관, 매 관의 부피는 1.4ml이다.
(5) 표기정보를 잘하고 절차를 진행하여 온도를 낮춘후 액체질소로 옮겨 장기적으로 보존한다.
4, 장기 소생
(1) 10ml류의 기관전대배양완충액 G를 15ml의 원심관에 취한다.
(2) 액질소탱크에서 얼어붙은 류기관세포를 꺼내 37 ℃ 의 수욕솥에 재빨리 넣어 녹인다.
(3) 수욕이 녹는 과정에서 냉동관을 가볍게 흔들어 냉동액이 1-2min 이내에 녹도록 해야 한다.
(4) 용해된 장기세포를 15ml의 원심관으로 빠르게 전이시키고 이액관을 사용하여 6-8회, 300g의 원심5min을 가볍게 불어준 후 상청액을 제거하고 장기세포 침전을 수집한다.적당량의 장기전대배양완충액 G를 첨가하여 1.5ml 원심관 300g 원심5min을 다시 옮긴다.
(5) 기질접착제가 중현되고 매 구멍마다 25ul 기질접착제가 24공 세포배양판에 깔려 배양함에 10-15min을 놓아 접착제로 만들고 500ul인 유방암류 기관배양기 A를 첨가한다.