Neuro2a (N2a) 쥐 뇌 신경종 세포

세포 소개

클론신경-2A이유R.J.클레베와F.H.러들경A흰쥐의 자생종양이 생기다.이 세포는 신경세포에서 축장 흐름에 응답하는 수축 시스템 역할을 하는 미관 단백질을 많이 생성한다.

세포 특성

1）출처:뇌신경모세포종

2）형태：아메바 줄기세포

3）함량:>1x10⁶ 세포수

4）사양:T25는병또는1ml냉동 보관관 포장

5) 용도:과학 연구에만 사용하다.

운송 및 저장:드라이 아이스운송소생하고 살아남기 쉽다세포：（1）1ml냉동보관소 포장 드라이아이스 운송, 수령 후-80도 냉장고는 밤새 보관한 후 액체 질소로 들어가거나 직접 소생한다.드라이아이스가 깨끗하게 휘발된 것을 발견하면,냉동 보관 병마개가 벗겨지고,파손 및 세포 오염, 즉시 우리에게연결。（2）T25는병 소생의 생존세포상온 배송,받다도착하면 세포 접수 후 처리 방법에 따라 조작한다.

세포 접수 후처리:

1) 세포를 받은 후,75%알코올 소독병 벽장T25는병을 놓다37℃ 배양함 배치 약2-3h배양병이 파손되고 액체가 넘치고 세포에 오염이 있는 것을 발견하면 사진을 찍은 후 즉시 우리에게 연락하십시오.

2) 에서4또는5X현미경으로 세포 상태를 확인하면서 방금 받은 세포를 사진 촬영(10×，20×) 각2-3장 및 배양병 외관 사진 한 장을 남겨 판매 후 받을 때 세포 상태의 근거로 삼는다.

3）밀착 세포: 세포는37℃ 배양함에 배치2-3h현미경으로 세포의 성장과 밀착 상황을 관찰하면 일부 밀착 세포는 택배 운송 과정에서 진동으로 탈락하고 탈락한 후 뭉치는 경우도 있다.거울로 세포의 생장 밀도를 관찰하면60%다음, 배양병 중 관액 배양기 제거 가능 (벽에 붙지 않은 세포가 원심 회수가 필요한 경우, 원래 배양병에 다시 삽입),새로 배합한 전용 배양기를 첨가하다.6-8ml, 세포 배양 상자에 넣어 계속 배양한다.세포 성장 밀도가 높으면70%-80%이상은 세포를 대물림할 수 있다.전대 과정에서 운송 진동으로 탈락한 세포는 원심 회수가 필요하다.

4）비고: 운송용 배지 (관액배지) 는 더 이상 세포를 배양하는 데 사용할 수 없습니다. 설명서 세포배지 조건에 따라 새로 배합한 전용 배지로 바꾸어 세포를 배양하십시오. 세포 받은 후 첫 번째 전대 제안T25는배양병1：2전대

하나.배양기그리고양성하다냉동 보관조건 준비:

1）준비MEM은배양기;고품질태소의 혈청,10%；이중 저항,1%。

2）배양 조건: 기상: 공기,95%; 이산화탄소,5%. 온도:37℃，배양함 습도는70%-80%。

3）냉동액：90%혈청，10% DMSO，현용현배합。

2.세포처리：

1）동존세포의 소생：：

포함1ml세포현액의 동존관은37℃ 수욕 중 빠르게 흔들어 해동하여 함유4~6mL 전용배지의 원심관에는 균일하게 혼합되어 있다.에서1000RPM의조건에서 원심을 떠나다.3-5분, 상청액을 버리고 배양기 중현세포를 전용한다.그리고 세포현액을 첨가해서6-8ml 전용배지의 배양병 (또는 그릇) 중37℃ 배양하여 밤을 지내다.다음 날 현미경으로 세포의 생장 상태와 세포 밀도를 관찰한다.

2）세포전대:만약세포최대 밀도80%-90%，즉진행 가능대대로 배양하다.。

밀착 세포 전대의 경우 다음 방법을 참조할 수 있습니다.

1. 버리다상청 을 배양하고 칼슘 을 함유하지 않다, 마그네슘 이온의PBS는윤세세포1-2차。

2. 가입0.25％（W / V는) 인슐린-0.53 mM EDTA에배양병（T25는병1-2ml，T75은병2-3ml），배치37℃배양함중소화1-2분(소화가 어려운 세포는 소화 시간을 적당히 늘릴 수 있다.)그리고후 현미경으로 관찰세포 소화상황,만약세포 가 대부분 둥글게 변하다탈락작업대를 다시 가져와 가볍게 두드려몇 번배양병 후가입3-4ml포함10%FBS는배양기종료소화。

3.가볍게 골고루 쳐서 빨아들이다, 에서1000RPM의조원심 분리3-5분, 맑은 액체를 버리고 보충1-2ml배양액을 고루 불다.세포 현액을 누르다1：2의 비율을 새 값으로 분할합니다.T25는병, 추가6-8ml설명서의 요구에 따라 배치한 새로운 전용배양기는 세포의 생장활력을 유지하고 후속전대는 실제상황에 따라1:2~1:5의 비례 진행。

3) 세포 동존:세포를 받은 후 배양 전에3후속 실험에 대비하여 세포 종자를 대신 동결하여 보관하다.아래T25는병의 예;

1. 세포냉동 보관 시따라세포가 대물림되는 과정은 소화된 세포를 원심관에 수집하여 혈구계수판계수를 사용하여 세포의 동존밀도를 결정할수 있다.일반 세포의 추천 냉동 밀도는1×10⁶~1×10⁷개 활세포/ 미터l.

2. 1000rpm원심3-5분, 상청을 제거합니다.조제된 세포 동존액으로 세포를 중현시키고, 매번1ml냉동액 함유1×10⁶~1×10⁷개 활세포/ ml하나의 동존관에 분배하여 세포를 동존관에 분배하고 명칭, 대수, 날짜 등 정보를 잘 표기한다.

3. 냉동 보관할 세포를 프로그램 냉각 상자에 넣고,-80냉장고에서 밤을 보낸 후 액체 질소 용기에 넣어 저장한다.동시에 액체 질소 용기에 냉동 보관관의 위치를 잘 기록하여 후속적으로 열람하고 사용할 수 있도록 한다.

참고 사항:

1. 모든 동물 세포는 잠재적인 생물 위해성이 있는 것으로 간주되며, 반드시 2급 생물 안전대 내에서 조작해야 하며, 모든 폐액 및 이 세포에 접촉한 그릇은 멸균한 후에야 버릴 수 있도록 주의해 주십시오.

2. 동존세포를 소생시킬 때는 항상 보호장갑, 옷, 보호면 착용을 권장한다.주의: 냉동 보관관이 액체 질소에 담그면 누출되고 서서히 액체 질소로 가득 찰 수 있습니다.해동 시 액체 질소가 기상으로 전환되어 용기가 폭발하거나 위험력으로 뚜껑을 불어 떨어뜨려 날리는 부스러기가 발생하여 인명 피해를 줄 수 있다.