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다중 면역 조화 염색실험 절차
샘플 준비: 고정, 항원 복구, 내원성 과산화물 효소 차단 등 파라핀 절편, 냉동 절편 또는 세포 파편 등의 처리를 포함한다.
1항 부화: 항체 희석액을 첨가하여 희석한 1항은 피광습함 안에서 일정 시간 부화한다.
2항 부화: 세탁 후 1항과 상응하는 종속의 HRP 표기 2항을 첨가하여 피광실온에서 부화한다.
TSA 형광 염료 염색: 카제인 형광 염료, 실온 반응 일정 시간 후 세탁.
항체 세척: 열복원 또는 항체 세척액 등의 방법으로 이전 라운드의 항체를 씻어 다음 라운드 표시를 할 수 있습니다.
중복 표시: 상술한 절차를 반복하여 서로 다른 일항과 형광 염료를 사용하여 다중 표시를 실현한다.
복염세포핵 및 봉편: DAPI 등 핵염료로 세포핵을 복염하고 항형광 담금질 봉편제 봉편을 적출한다.
거울 검사 사진: 형광 현미경과 같은 장치에서 이미지를 관찰하고 수집합니다.
다중 면역 조화 염색주의사항
항체 선택 및 최적화: 특이성이 높고 검증된 항체를 선택하고 항체의 농도와 부화 시간 등 조건을 최적화해야 한다.
표위 엄폐 문제: 항체의 염색 순서에 주의하고 표위 엄폐 현상을 피하며 항체 순서를 조정하거나 다른 방법으로 해결할 수 있다.
실험 대조 설정: 양성 대조와 음성 대조를 설정하여 실험 결과의 정확성과 신뢰성을 확보한다.
신호 증폭 배수의 제어: 구체적인 실험 수요와 형광 신호 강도에 따라 TSA 증강제 첨가 여부 등 수단을 합리적으로 선택하여 신호 증폭 배수를 제어한다.