생쥐 인터루킨1 베타(IL-1 베타) ELISA 키트

1.샘플 유형 및 채집:

혈청：혈청 분리관에 수집된 전혈 표본을 실온에 두다0.5-2시간 또는4℃밤을 지내다1000×g원심20 분 (분) 을 입력하면 됩니다.-20℃또는-80℃보존하되 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.
혈장：쓰다EDTA는또는 헤모글로빈을 항응고제로 표본을 채취하고 표본을 채취한 후30분 이내2-8℃ 1000×g원심15분, 검색을 위해 위쪽을 찾거나 배치합니다.-20℃또는-80℃보존하되 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.

조직 균일장:예냉의PBS (0.01M, pH=7.4)조직을 씻어 잔류 혈액을 제거합니다 (균장에 분해 된 적혈구는 측정 결과에 영향을 미칩니다). 무게를 잰 후 잘린 조직과 해당 부피의PBS는(일반적으로1:9의 중량 부피비 (예:1g의 조직 샘플 대응9ml의PBS는, 구체적인 부피는 실험의 수요에 따라 적당히 조정하고 기록을 잘 할 수 있다.추천 위치PBS는프로테아제 억제제를 첨가한다) 유리 균장기에 넣어 얼음 위에서 충분히 연마한다.조직세포를 더 분해하기 위해 균장액을 초음파 파쇄하거나 동결을 반복할 수 있다.마지막으로 액체를 고르게5000×g원심5~10분,찾으면 검사할 수 있고,또는 업스트림 배치-20℃ 또는-80℃ 로 보존하되 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다。

세포분해액: 배양액 흡입, 사용PBS(0.01M, pH 7.4)는 세포를 한 번 씻는다.세포로 세포를 긁어내고 2~5mL PBS(0.01M, pH 7.4)를 넣는다.부유 세포는 생략할 수 있다.세포현액을 모아 4℃ 1000×g 원심분리 10min, 배양기를 버리고 예냉된 PBS로 3회 윤색한다.적당량의 예냉 PBS 또는 비변성 세포 분해액(프로테아제 억제제를 사용하기 전에 넣는 것) 중현 세포를 넣으면 보통 6공판 한 구멍의 세포량이 150~250μL PBS 중현이 필요하다.시료를 -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 넣어 시료를 냉동시킨 다음 실온에 넣어 시료를 해동하고 3회 반복적으로 얼려 세포를 충분히 분해시키거나 시료를 초음파 파쇄하여 분해의 목적을 달성할 수 있다.4 ℃ 10000 × g 원심분리 10min, 세포파편을 제거하고 제거하면 검사할수 있다.또는 업스트림 배치-20℃ 또는-80℃ 로 보존하되 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다。

세포 배양물 상청 또는 기타 생물 표본:부탁합니다1000×g원심20분, 검색을 위해 위쪽을 찾거나 배치합니다.-20℃ 또는-80℃ 는 보존하지만 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.

2.샘플 보존 및 안정성

샘플은2-8℃조건하에서 저장할 수 있다72h，에서- 20℃또는-80℃저장 가능6개월 및이상.샘플을 수집한 후, 한 번에 검사한 것이 아니므로, 한 번의 용량에 따라 냉동 저장을 나누어 반복적으로 냉동되지 않도록 하십시오.

단계:

1. 번호: 샘플을 미세 구멍에 대응하여 순서대로 번호를 매기고, 판마다 음성 대조를 설정해야 한다2공, 양성대조 2공, 공백대조 1공(공백대조공은 샘플 및 효소표시시약을 첨가하지 않고 나머지 각 단계는 조작이 같다）。

2. 샘플링: 각각 음, 양성 대조 구멍에 음성 대조, 양성 대조를 첨가한다50μl。그런 다음 측정 대기 샘플 구멍에 샘플 희석액 40 μl를 추가한 다음 측정 대기 샘플 10 μl를 추가합니다.샘플링은 샘플을 효소 표지판 구멍 밑부분에 추가하여 가능한 한 구멍 벽에 닿지 않고 가볍게 흔들어 골고루 섞는다.

3. 온육: 봉판막으로 봉판 후치37℃ 온육30분。

4. 배액:30배 농축 세척액용 증류수 30배 희석 예비용.

5. 세탁: 봉판막을 조심스럽게 벗기고 액체를 버리고,뿌리치다, 구멍마다 세척액을 가득 채워 고정30초 후에 버리고 이렇게 다섯 번 반복하여 찍습니다.

6. 효소 첨가: 구멍마다 효소 표적 시약 첨가50μl，빈 구멍 제외。

7. 온육: 봉판막으로 봉판 후치37℃ 온육30분。

8. 세탁: 봉판막을 조심스럽게 벗기고 액체를 버리고,뿌리치다, 구멍마다 세척액을 가득 채워 고정30초 후에 버리고 이렇게 다섯 번 반복하여 찍습니다.

9. 발색: 구멍마다 발색제를 먼저 넣는다A50는μl, 발색제 추가B50는μl, 가볍게 흔들어 섞고,37℃ 피광발색10-20분.

10.종료: 구멍당 끝액50μl, 중지 반응(이때 파란색은 노란색으로 바뀝니다.)。

11.측정: 빈 구멍으로 0,450nm파장은 순서대로 각 구멍의흡광도 (OD는값). 측정은 종료액을 넣은 후15분 내로 진행하다.

참고:

1. 시약 준비: 시약 상자는 냉장 환경에서 꺼내 실온에서 균형을 맞춰야 한다15-30분 후 사용 가능합니다.한 번의 실험에 필요한 효소 표시줄을 준비하고, 다른 것은 마이크로 보드에서 떼어내고, 밀봉하고, 설명서의 요구에 따라 보존하여 다음에 사용할 수 있도록 할 수 있다.

2. 샘플링: 실험 작업 중에 일회용 멸균 흡입기를 사용하여 오염을 피하십시오.샘플을 추가할 때 기포가 생기지 않도록 주의하고 샘플을 효소표지판 밑부분에 추가하여 될수록 공벽에 닿지 않고 가볍게 흔들어 고루 섞는다.반응 시약을 첨가하는 것과 마찬가지로, 샘플링 과정 중 첫 번째 구멍과 마지막 구멍의 샘플링 시간 간격은 가능한 한 작다 (일반적으로10분 이내) 너무 크면 서로 다른'예온육'시간이 발생하여 측정치의 정확성과 중복성에 뚜렷한 영향을 줄 수 있다.값의 정확성을 측정하기 위해 재구멍을 설정하여 실험하는 것을 추천합니다.

3. 온육: 시료의 증발을 방지하기 위하여 실험할 때 뚜껑이나 복막을 덧씌운 효소표지판을 습함안에 넣어 액체가 증발하지 않도록 해야 한다. 판을 씻은후 되도록 빨리 다음단계의 조작을 진행해야 한다. 언제나 효소표지판이 건조상태에 있지 않도록 해야 하며 동시에 주어진 온육시간과 온도를 엄격히 준수해야 한다.

4. 세탁:진한 세척액가능있을 거야결정석출, 희석 시 수욕 중 가온 보조 용해 가능, 세탁 시 결과에 영향을 주지 않습니다.충분히 세탁하는 것이 매우 중요하므로 매번 세탁 과정에서 세척액을 * 털어내야 한다.세탁 중 반응구멍에 남아 있는 세척액은 흡수지에 말려야 하며, 흡수지를 반응구멍에 직접 넣어 물을 흡수하지 말아야 하며, 동시에 판 바닥에 남아 있는 액체와 손가락 자국을 가볍게 닦아 마지막 효소표시기의 판독에 영향을 주지 않도록 해야 한다.자동 세판기를 사용할 경우 숙련된 사용 후 정식 실험 과정에서 사용하십시오.

5. 반응 시간의 제어: 바탕물을 넣은 후 정시에 반응 구멍의 색깔 변화를 관찰하고, 만약 색깔이 비교적 짙은 것을 관찰한다면, 미리 종료액을 넣어 반응을 종료하고, 반응이 너무 강해서 효소 표시기의 광밀도 판독에 영향을 주지 않도록 하십시오.

6. 바탕물: 바탕물은 빛을 피하여 보존하고 저장과 온육할 때 강한 빛이 직접 비치지 않도록 하십시오.