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북경시 풍대구 해응로 8호원 3호동 6층 603
제품 카테고리
세노신창(베이징)과학기술유한공사
개요
TCS SP8 DLS Leica 레이저 공초점 현미경은 두 가지 이미징 시스템의 장점을 하나로 합칩니다. Leica TCS SP8 DLS(디지털 슬라이스)를 사용하면 현미경에서 부드러운 단일 평면 조명으로 공초점이 가능합니다.TwinFlect 반사경을 개발함으로써 우리는 공초점 플랫폼인 Leica TCS SP8을 간단하고 사용하기 쉬운 다기능 광편 현미경으로 바꿀 수 있다.
제품 정보
라이카 레이저 공초점 현미경 (예: Leica SP8, Stellaris 시리즈) 은 생물의학, 재료과학 등 분야에 널리 응용되는 고해상도 3차원 영상 시스템이다.이 작업은 광학, 레이저 제어 및 이미지 처리 기술을 결합해야 합니다. 다음은 자세한 작업 지침입니다.
1. 작업 전 준비
1. 환경 및 장치 점검
환경 요구 사항:
독립적인 암실이나 차광 환경은 외부 광선이 형광 신호를 방해하지 않도록 한다.
온도는 20-25 ℃, 습도는 ≤ 60% 로 조절하여 렌즈의 결로나 회로의 고장을 방지한다.
장치 검사:
레이저 (예: 405nm, 488nm, 561nm, 633nm) 상태 표시등이 정상인지 확인합니다 (녹색은 준비됨).
물경 (예: 10x/0.3, 20x/0.75, 63x/1.4 기름경) 이 청결한지, 적재대 이동이 원활한지 검사한다.
레이저 냉각기와 같은 냉각 시스템을 켜고 온도가 설정값 (일반적으로 18-22 ℃) 에 안정되도록 합니다.
2. 샘플 준비
바이오 시료:
살아있는 세포는 Lab-Tek II와 같은 공초점 전용 배양 접시에 배양해야 하며, 일반 볼륨 조각을 사용하여 초점이 어려운 것을 피해야 한다.
고정 조직 절편은 항형광 담금질 봉편제 (예: ProLong Gold) 를 사용하여 봉해야 하며, 두께는 ≤ 20 μm이다.
재료 샘플:
비투명 시료는 표면 거친도 Ra<0.1μm까지 광택을 내야 하며, 폴리머와 같은 투명 시료는 자발적인 형광 방해를 피해야 한다.
태그 요구 사항:
형광 염료는 레이저 파장과 일치해야 합니다 (예: DAPI는 405nm, Alexa Fluor 488은 488nm).
다색 표식 시 염료 발사 스펙트럼이 중첩되지 않도록 합니다 (스펙트럼 분할 기능을 통해 신호를 분리할 수 있음).
2. 기초조작절차
1. 전원 켜기 및 초기화
시작 순서:
총 전원 켜기 → 2.레이저 냉각 시스템 가동 → 3.현미경 호스트 켜기 → 4.LAS X 또는 Stellaris Suite와 같은 제어 소프트웨어를 시작합니다.
소프트웨어 자체 검사:
소프트웨어는 레이저, 스캐너 헤드, 캐리어 등의 모듈을 자동으로 감지하여 상태가"Ready"인지 확인합니다.
"Daily Check"기능을 실행하여 광선을 조정하고 PMT 이득, 레이저 전력과 같은 시스템 감도를 감지합니다.
2.샘플 위치 및 초점
저배경 미리보기:
10x 에어 미러를 선택하고 레이저를 끄고 할로겐 램프와 같은 투과광을 사용하여 샘플 영역을 빠르게 배치합니다.
캐리어 XY 다이얼이나 소프트웨어 탐색 기능을 통해 대상 위치로 이동합니다.
총 초점 초점:
488nm 레이저 (예: 5%) 를 켜고 실시간 관찰 "Live"모드를 선택합니다.
Z축 스텝 모터를 조절하고"Fine Focus"도구를 사용하여 형광 신호가 강할 때까지 점진적으로 초점을 맞춥니다.
63x 오일 미러와 같은 고배율 대물경으로 전환할 때는 대물경과 덮개 볼륨 사이에 Type F 오일과 같은 전용 침유를 넣어야 합니다.
3. 이미지 수집 매개 변수 설정
레이저 전력 및 PMT 이득:
레이저 출력: 빛의 표백을 피하기 위해 1% 부터 점진적으로 증가합니다 (일반적으로 20% 미만).
PMT 이득: 신호 강도가 100-800(12bit 이미지) 사이가 되도록 조정하여 포화(>4095)를 피합니다.
스캔 매개 변수:
해상도: 필요에 따라 512×512(빠른 미리보기) 또는 2048×2048(고정밀 이미징)을 선택합니다.
스캔 속도: 선 평균 횟수 1-4 회 (소음이 클 때 증가), 프레임 평균 횟수 1-8 회 (살아있는 세포 동적 이미징 시 감소).
핀홀 크기: 일반적으로 1 Airy 단위(AU)로 설정되며 신호 잡음과 해상도의 균형을 맞춥니다.
스펙트럼 설정:
다색 표식 시 샘플 발사 스펙트럼을 Lambda Scan 모드로 스캔하여 DAPI: 410-480nm, Alexa Fluor 488: 500-550nm와 같은 파장 범위를 설정합니다.
4. 3D 이미징 및 시간 시퀀스
Z축 스택:
시작 / 끝 위치 및 단계 (예: 0.5 μm) 를 설정하면 소프트웨어가 자동으로 다중 레이어 이미지를 촬영하고 3D 모델을 작성합니다.
시간 순서:
살아있는 세포가 이미징될 때 간격 (예: 30초당 1프레임) 과 총 프레임 수 (예: 100프레임) 를 설정하여 동적 프로세스를 기록합니다.
"Autofocus" 기능을 활성화하여 초점 안정을 유지하고 세포 이동으로 인한 초점 이탈을 방지합니다.
3. 라이카 레이저 공초점 현미경 기능 응용
1. 라이트 라이트 모드(Light Sheet)
제브라피시 배아와 같은 두꺼운 샘플에 적용되는 빠른 저광독성 영상.
작업 단계:
라이트 모듈로 전환하여 조명 라이트 두께를 조정합니다 (일반적으로 2-5 μm).
투과광 및 형광 신호와 같은 듀얼 카메라 동시 수집을 설정합니다.
멀티뷰 기능을 사용하여 다각도 이미지를 결합하여 3D 구조를 재구성합니다.
2. 초해상도 이미지(예: STED)
회절 한계를 돌파하여 해상도가 20-50nm에 달한다.
운영 포인트:
전용 STED 대물렌즈(예: 100x/1.4 오일 렌즈)와 depletion 레이저(예: 592nm)를 사용합니다.
depletion 레이저 출력(일반 50-200mW)과 2D 또는 3D STED와 같은 위상 마스크 모드를 조정합니다.
수집 후 Huygens 또는 Thunder 소프트웨어를 사용하여 롤백 처리합니다.
3. 스펙트럼 분할 및 선형 볼륨 제거
다색 표식 시 중첩 신호 분리:
Lambda Scan 모드에서 샘플 발사 스펙트럼 라이브러리를 가져옵니다.
스펙트럼 데이터를 Spectral Unmixing 도구에 로드하면 각 채널의 순수 신호가 자동으로 계산됩니다.
임계값을 조정하여 배경 잡음을 제거하고 버스트된 이미지를 저장합니다.
4. 유지보수와 정비
1.일상 청소
옵티컬 컴포넌트:
풍선을 불어 물경, 필터 표면의 먼지를 제거하고 면봉이나 휴지를 사용하지 않고 직접 닦는다.
청결이 필요하면 렌즈지에 소량의 에탄올 (또는 전용 청결액) 을 묻혀 나선형으로 가볍게 닦는다.
운반대 및 샘플 창고:
정전기 방지 천으로 닦아 기름이나 봉정제가 남아 있지 않도록 한다.
2. 레이저 유지 관리
사용 제한:
레이저 튜브의 과열 손상을 방지하기 위해 8시간 이상 계속 작동합니다.
전원을 끌 때 레이저 출력을 1% 로 낮춘 다음 레이저 스위치를 끕니다.
수명 모니터링:
소프트웨어 Laser Status 인터페이스에서 남은 수명(예: 488nm 레이저 보통 ≥ 20000시간)을 확인합니다.
수명 종점에 가까워지면 레이저 튜브를 교체하기 위해 Leica에 미리 연락하십시오.
3. 정기 교정
광선 보정:
분기마다 TetraSpeck과 같은 표준 형광 마이크로볼을 사용하여 광축 및 핀홀 정렬을 조정합니다.
기계적 교정:
매년 탑재대 XY/Z축 정밀도(오차는 <0.1μm)를 점검하고 필요할 경우 스텝모터 매개변수를 조정한다.
5. 흔히 볼 수 있는 문제 해결
이미지 무신호
레이저가 켜져 있는지, PMT 이득이 > 0인지, 필터가 일치하는지 확인합니다 (예: 필터가 차단되지 않은 신호를 보내는 경우).
이미지 흐림
물경 침유가 충분한지, 바늘구멍이 오프셋되었는지, 샘플이 평평한지 확인합니다 (예를 들어 살아있는 세포가 돌출되어 초점이 이탈됨).
레이저 출력 불안정
레이저 출구 창을 청소하고 냉각 시스템 수온이 설정 범위 (예: ± 0.5 ℃) 에 있는지 확인합니다.
소프트웨어 끊김
다른 대형 프로그램을 끄고 이미지 해상도나 스캔 속도를 줄이거나 컴퓨터 메모리를 늘립니다 (권장 ≥ 32GB).
6. 라이카 레이저 공초점 현미경 안전 주의사항
레이저 보안:
작동 시 레이저 보호 안경을 착용합니다 (파장은 모든 사용 레이저 선을 덮어야 함).
직시 레이저 빔이나 반사 광선을 금지하고 피부가 고출력 레이저 (예: > 50mW) 에 장시간 노출되지 않도록 합니다.
생물 안전:
살아있는 세포나 병원체를 처리할 때는 생물안전궤 안에서 조작해 샘플 오염을 방지한다.
화학 안전:
에탄올과 같은 유기용매로 청소할 때는 휘발가스를 흡입하지 않도록 통풍장 안에서 조작한다.
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