KMS-21BM_사람 다발성 골수종 세포

KMS-21BM_인간 다발성 골수종 세포

제품 정보

세포 이름：KMS-21BM_사람 다발성 골수종 세포

종속 출처: 사람

성별 나이: 여성,67살

조직 소스: 흉강 축액

성장 특성: 부유 생장

세포 형태: 림프구 샘플

세포 사양: 1 X 10⁶cells/T25 또는 1 mL 동결 보관 튜브

배양 조건:RPMI 1640 + 10% 태아 소 혈액，37 ℃, 5% 이산화탄소

냉동 저장 조건： 90% FBS + 10% DMSO

전대 방법: 일:3 전대，2-3일전 1대

세포 배양 조작

드라이아이스 운송：세포를 받으면 즉시 액체 질소로 옮겨서 보존하거나,-80°C냉장고는 단기간 냉동하거나 직접 소생한다

상온 수송：세포를 받은 후, 즉시 세포 배양병을 포장함에서 꺼내고, 아래 조작 절차에 따라 배양 전대를 진행하십시오

세포 전대：세포 밀도가 80~90% 에 달하여 대대로 배양할 수 있다

병속 세포 배양 조작 절차

벽에 붙여 배양한 세포에 대해 부치기 전에 우리는 배양기를 전체 배양병에 가득 채워 제품 운송 과정에서 벽에 붙인 세포의 탈락을 줄일 것이다.

1. 세포를 받은 후에는 오염 여부를 주의 깊게 관찰하십시오.배양병을 거꾸로 현미경 아래에 놓고 혼탁 여부, 세균 오염 여부를 꼼꼼히 검사한다.운송 과정에서 흔들림이 존재하고, 일부 세포는 온도 변화에도 민감하기 때문에, 일부 세포가 떨어져 떠다니는 상황이 존재할 수 있으며, 이러한 세포는 여전히 살아있는 세포이므로 버리지 마십시오. 원심부집 후 대대로 사용할 수 있습니다.

2. 붙박이 세포의 경우 생체안전 캐비닛 환경에서 배양병의 여분의 배양기를 진공펌프로 제거하여 5~8mL 정도 남은 후 배양기에 따라 적합한 CO2 함량의 37을 선택한다℃항온 배양 상자에서 배양하고 병마개를 비틀어 놓다.만약 세포가 이미 배양병에 가득 자랐다면, 즉시 전대하십시오.

3. 부상하는 세포의 경우, 생물 안전 캐비닛 환경에서 배양병의 세포를 원심관으로 옮기고, 150g의 원심을 5분 동안 제거하고, 상청을 제거한 후 5mL의 배양기로 세포를 흩어 새로운 배양병으로 옮긴 후 적합한 CO2 함량의 37에 넣는다℃항온 배양함에서 배양하다.

냉동 보관관 세포 조작 절차

참고: 세포의 높은 활착률을 보장하기 위해 제품을 받은 후 즉시 해동하여 배양하십시오.

1. 냉동 보관관을 37에 놓다℃수욕 중에 왔다갔다하며 빠르게 해동하다.오염을 피하기 위해서, 냉동 보관 파이프를 수면 위에 두어야 한다.해동은 약 1분 정도 빠르다.

2. 일단 냉동관에 액체가 녹으면 즉시 꺼내 알코올 분사로 냉동관 표면을 닦는다.이 단계에서 다음 작업은 생물 안전 캐비닛에서 수행해야 합니다.

3. 냉동보관관에 있는 액체를 완배지 5mL가 함유된 원심관으로 옮기고 원심분리 150g을 5분간 진공펌프로 제거한다.

4. 배양기를 다 쓰고 세포를 다시 떠서 새로운 배양병으로 옮긴다.세포 소생의 생존율을 보장하기 위해, 배양기를 37로 하세요℃수욕은 예열 후 사용한다.

5. 적절한 CO2를 포함하는 37에 세포 배치℃항온 배양함에서 배양하다.

밀착 세포 전대 배양

1. 배양병 속 배양기 흡수 및 폐기, P 첨가BS는한 번 윤택하게 씻다.

2. 가입 1mL 0.25 (w/v) 트립신 EDTA용액, 그리고 37℃ 배양상자에서 부화하여 세포가 벽에서 떨어져 분리될 때까지 한다.이 프로세스에는 대략 3 이 필요합니다.-5분.

3. 가입 2mL완배지는 인슐린을 중화시키고 가볍게 불어 세포를 배양병 표면에서 떨어뜨려 세포를 분산시킨다.

4. 세포현액을 모아15ml원심관 안에서,150g 원심분리 5분, 진공펌프로 상청을 제거한다.적당량의 배양기를 취하여 세포를 다시 매달아 새로운 배양병으로 옮겨 배양한다.

부유세포 전대는 다음과 같은 방법을 참고할 수 있다.

1. 직접전대법

1. 부유 세포가 80~90% (세포 현액이 노랗게 변함) 까지 자라면 대물림할 수 있다;

2. 쓰다빨대세포 현액 1 / 2 ~ 1 / 3을 흡입한다.

3. 적당량의 신선한 배양기를 넣고 계속 배양하다.

   2. 원심전대법 (세포파편이 발견된 경우)

4. 세포현액을원심관내부

5. 150g 원심분리 5min, 상층 청액 버리기;

6. 신선한 배양기 중현세포 사용하기;

7. 빨대 는 적당량 의 세포 현액 을 흡수하여 새 것 으로 넣는다배양병, 적당량의 신선한 배양기를 첨가하여 계속 배양한다.

세포 동존 조작

1. 1000rpm 원심분리 5분 상청 제거.혈청 중현세포 1mL를 넣고 세포 수에 따라 혈청과 DMSO를 넣어 가볍게 섞는다，DMSO 최종 농도는 10%이며 세포 밀도는 1 x 10 이상이어야 합니다.⁶/mL，각 냉동 보관소에는 1mL의 세포 현액이 냉동 보관되어 있으니, 냉동 보관소에 주의하여 표시를 잘 해야 한다；

2. 냉동 보관관을 프로그램 냉각 상자에 넣고 -80 ° C 냉장고에 넣고 적어도 2 시간 후에 액체 질소 관개 저장으로 옮깁니다.

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