JC-1 미토콘드리아 막 전위 측정 키트

제품 소개

JC-1은미토콘드리아 막 전위 측정 시약함（JC-1 Mitochondrial 막 잠재 분석 키트) 는 다음과 같습니다.JC-1은형광 프로브를 위해 세포, 조직 또는 순화 미토콘드리아 막의 전위 변화를 빠르고 민감하게 측정하는 시약 상자.미토콘드리아막 전위의 저하는 세포 멸망 초기의 상징적인 사건이다.따라서 이 시약함은 초기 세포 사멸 검사에 사용할 수 있다.

JC-1은미토콘드리아 필름의 전위를 측정하는 데 널리 쓰인다△ψm비트의 이상적인 형광 프로브.JC-1은염료는 전세 의존적인 방식으로 미토콘드리아 안에 축적되어 세포, 조직 또는 순화된 미토콘드리아 막의 전위를 측정하는 데 사용할 수 있다.정상 미토콘드리아 내,JC-1은미토콘드리아 기질에 모여 중합물을 형성하고 중합물은 강렬한 적색형광(Ex=585 nm, Em=590 nm）；불건전한 미토콘드리아는 필름 전위의 저하 또는 상실로 인해JC-1은포장에만 단일 형태로 존재할 수 있으며 녹색 형광 (Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1은정성검사에 사용할수 있을뿐만아니라 색갈의 변화로 하여 선립체막의 전위의 변화를 아주 직접적으로 반영할수 있다.미토콘드리아의 탈극화 정도가 빨간색을 통과할 수 있기 때문에 정량 검사에도 사용할 수 있다/녹색 형광 강도의 비율로 측정하다.

제품 구성

저장및 운송：-20℃ 피광 건조 보존, 적어도1연간 유효.운송:아이스팩운송

사용 방법 JC-1 미토콘드리아 막 전위 측정 키트

1. JC-1염색 작업액 제조

육공판의 경우, 본 시약함은 검측할 수 있다100견본.구멍당 필요JC-1은염색 작업액의 양은1ml, 기타 배양 그릇의 JC-1은염색 작업액의 사용량은 이렇게 유추한다.세포현액에 대해 50～100만세포 수요 0.5mL JC-1염색 작업액. 적당량을 취하다 JC-1은（200×), 각50μL JC-1의（200×) 가입 8ml초순수의 비율 희석 JC-1은격렬한 진동은 충분히 용해되고 섞인다 JC-1은. 그리고 다시 가입 2mL JC-1의염색 완충액(5×), 혼합하면 JC-1은염색 작업액.

【주의】:반드시 먼저 JC-1은（200×) 초순수(시약함 제공)로 충분히 용해하여 섞은 후 첨가 가능 JC-1은염색 완충액(5×）。먼저 조제할 수 없다 JC-1은염색 완충액(1×) 재가입 JC-1은（200×), 이렇게 JC-1은충분히 녹기 어려워 후속 검사에 심각한 영향을 줄 수 있다.

2. 양성 대조의 설정

CCCP는（10mM) 추천 1∶1000 의 비율을 세포배양액에 첨가하여 10μM, 처리 세포 20분. 다음 절차에 따라 마운트합니다. JC-1은, 미토콘드리아 막 전위 측정. 대부분의 세포에 대해 일반적으로 10μM CCCP처리 20 분후선 입체의 막 전위는وانquan상실,JC-1은염색 후 관찰은 녹색 형광이어야 한다.정상적인 세포경은 JC-1은염색 후에는 적색 형광을 표시해야 한다.특정 세포에 대해CCCP는의 작용 농도와 작용 시간은 가능

다름에 따라 관련 문헌 자료를 참고하여 결정해야 한다.

3. 부유 세포의 경우

1）取10～60 만세포, 중현상 0.5mL세포배양액 중 세포배양액에는 혈청과 페놀홍을 함유할 수 있다.

2) 가입0.5mL JC-1염색 작업액을 여러 번 뒤집어 섞다.세포 배양 상자 중 37℃ 부화20분。

3) 부화 기간, 매 1mL JC-1의염색 완충액(5×) 가입 4ml증류수의 비율, 적당량의 배합 JC-1은염색 완충액(1×), 그리고 얼음 목욕탕에 놓습니다.

4）37℃ 부화가 끝난 후,600×g4의℃ 원심분리3～4분침전 세포.상청을 버리고 가능한 한 세포를 흡입하지 않도록 주의해라.

5) 용 JC-1은염색 완충액(1×) 세탁 2 회: 가입 1mL JC-1의염색 완충액(1×) 중현세포,600×g4의℃ 원심분리3～4분침전 세포, 상청을 버리다.재가입 1mL JC-1의염색 완충액(1×) 중현세포,600×g4의℃ 원심분리3～4분침전 세포, 상청을 버리다.

6) 적당량 더 쓰기 JC-1은염색 완충액(1×) 다시 걸면 형광현미경 또는 레이저공초점현미경으로 관찰할수도 있고 형광분광으로 관찰할수도 있다 광도계 검사나 유식세포계 분석.

4. 밀착 세포의 경우

【주의】: 밀착세포의 경우 형광분광광도계나 류식세포계로 검사하기를 원한다면 먼저 세포를 수집하고 중현한후 부유세포의 방법을 참고하여 검사할수 있다.

1) 육공판의 한 구멍에 대해 배양액을 흡입하여 구체적인 실험에 따라 필요하다면 사용할 수 있다 PBS는또는 기타 적당한 용액으로 세포를 한 번 세척하고, 1ml세포 배양액.세포배양액에는 혈청과 페놀홍이 함유되어 있다.

2) 가입 1mL JC-1의염색 작업액으로 충분히 섞다.세포 배양 상자 중 37℃ 부화20분。

3) 부화 기간, 매 1mL JC-1의염색 완충액(5×) 가입 4ml증류수의 비율, 적당량의 배합 JC-1은염색 완충액(1×), 그리고 얼음 목욕탕에 놓습니다.

4）37℃ 부화가 끝나면 상청을 흡입하여 사용JC-1은염색 완충액(1×) 세탁 2 차.

5) 가입 2ml세포배양액, 배양액에는 혈청과 페놀홍이 함유될 수 있다.

6) 형광 현미경이나 레이저 공초점 현미경으로 관찰한다.

5. 순화된 미토콘드리아의 경우

1) 조제된 JC-1은염색 작업액 재사용 JC-1은염색 완충액(1×) 희석 5 배.

2）0.9mL 5배로 희석했어 JC-1은염색 작업액에 0.1ml총 단백질량은 10～100μg의순화된 미토콘드리아.

3) 형광분광광도계 또는 형광효소표시기로 검측: 혼합후 직접 형광분광광도계로 시간스캔(시간 스캔), 자극 파장은485nm, 발사 파장은 590nm. 형광 효소 측정기를 사용하면 자극 파장을 485nm에서475～520nm범위 내에서 발생 파장을 설정합니다.또한 다음 단계를 참조하십시오. 6 의 파장 설정은 형광 체크를 수행합니다.

4) 형광 현미경 또는 레이저 공초점 현미경으로 관찰: 방법은 아래 단계와 같다 6。

6. 형광 관측 및 결과 분석

검사 JC-1은단일체일 때 자극광을 490nm, 발사광 설정 530nm; 체크 JC-1은중합체 시 자극광을 525nm, 발사광 설정 590nm。

【주1】: 여기서 형광을 측정할 때 자극광과 발사광을 최대자극파장과 최대발사파장에 설치할 필요가 없다.형광현미경으로 관찰하면 JC-1은폴리머일 때는 요오드화 피리딘이나 Cy3는표준 대역 필터를 사용합니다.검사 JC-1은단일 항목을 사용하여 항상 체크 가능 FITC는또는 GFP는표준 대역 필터입니다.녹색 형광이 나타나는 것은 미토콘드리아 막의 전위가 떨어지고 이 세포가 세포 멸망 초기에 있을 가능성이 높다는 것을 의미한다.적색형광이 나타난다는것은 미토콘드리아막의 전위가 비교적 정상적이고 세포의 상태도 비교적 정상적이라는것을 말해준다.

주의사항

1）JC-1은（200×) 에서4℃, 빙욕 등 낮은 온도에서 응고하여 원심관 바닥, 관벽 또는 관뚜껑 안에 붙일 수 있다20～25℃ 수욕온육은 잠시 후 전부 녹인 후 사용한다.

2) 마운트 완료 JC-1은후용 JC-1은염색 완충액(1×) 세탁 시, JC-1은염색 완충액(1×) 유지 4℃ 정도인데 이때 세탁 효과가 좋습니다.

3）JC-1은프로브 적재 및 세탁 후 가능한 한 30분에서 후속 테스트를 완료합니다.검사하기 전에 빙욕으로 보관해야 한다.

4) 제발JC-1은염색 완충액(5×) 모두 작성JC-1은염색 완충액(1×），이 키트는 사용 중에 직접 사용해야 합니다.JC-1은염색 완충액(5×）。

5) 발견된 경우 JC-1은염색 완충액(5×)에 침전이 있어 모두 녹여야 사용할 수 있으며, 37℃ 가열은 용해를 촉진한다.

6）CCCP는미토콘드리아 전자 전달 체인 억제제로 독이 있으니 조심해서 보호하세요.

7) 귀하의 안전과 건강을 위해 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.

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JC-1JC-1 부분 인용문헌JC-1 미토콘드리아 막 전위 측정 키트

(1) [IF=9.7]골관절염 진행에 대한 철철철철철철철관관관절염의 기여와 GPX4의 이중 기능의 기여EBioMedicine는 게시 시간:2022년 1월 27일 DOI:https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

이 그림의 원본 데이터는 문헌 (1) 에서 나온 것이다.

(2) [IF=11.4]VDR는 당병병 VDR의 신장 관 세포 손상에 대한 보호 메커니즘으로 미토콘드리아 기능을 조절합니다. -Redox 생물학 -볼륨 70, 2024 년 4 월, 103062.V

이 그림의 원본 데이터는 문헌 (2) 에서 나온 것이다.

(3)[IF=11.1]LONP1은 미토콘드리아 기능을 보호하고 만성 신장 질병을 감소시키기 위해 HMGCS2를 목표로 합니다.EMBO Mol Med의(2023)15: e16581https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

면역 형광 공위치 분석 mPTC (위, 눈금자: 20um) 와 사람 신장 조직 (아래, 눈금자: 200um) 에서 LONP1, HMGCS2 및 미토콘드리아.

이 그림의 원본 데이터는 문헌 (3) 에서 나온 것이다.