인신피질 근곡소관 상피세포 HK2(STR)

1. 사람의 신피질 근곡소관 상피세포 HK2 (STR)배양 조건

2.수거 후 처리

소생세포 처리 방법:좋은 상태로 배양한 후 배양액을 가득 채우고 병 입구를 봉하는 것이 세포를 운반하는 가장 좋은 방법이다.세포를 받아서 75% 알코올로 전체를 뿌려세포병,엄격 무균후세포병을 배양함에 넣고 2-4시간 동안 가만히 두어 세포 상태를 안정시키다.정지 후 현미경으로 세포의 생장 상태를 관찰하고 세포를 서로 다른 배수로 사진으로 찍어 보존(최고 40x, 100x, 200x 각 1장)하며, 지난 3일 사진은 중요한 판매 후 근거로 사진의 기본 수신 상태가 양호하다는 것을 제공하지 않는다.

냉동 세포 처리 방법:세포를 받은 후, 거품 상자 중의 드라이아이스가 남아 있는지, 냉동 보관소가 완전무결한지, 해동 상황이 있는지 관찰하고, 만약 드라이아이스가 기화되거나 냉동 보관소가 해동 파손 현상이 있는 것을 발견하면, 즉시 사진을 찍고 우리에게 연락하십시오.세포가 수령 서명한 지 3일 이내에 우리에게 연락하지 않으면 수령이 양호한 것으로 묵인됩니다.소생 제 1 관 활성 문제가 있으면 즉시 연락 주십시오. 기술자가 당신과 소통하고 지도한 후 소생 제 2 관,우리측과 연락하지 않고 제멋대로 소생하다. 제2관에 문제가 생기면 판매 후 판매하지 않는다.

세포 배양 절차

a 、세포 전대: 만약에80% 의 합류도를 초과하지 않았을 때, 병에 든 배양액을 원심관에 수집하여 5ml 배양기를 남겨 37 ℃, 5% CO에 넣는다₂부화상자 배양;세포 밀도가 80% 이상이면 대물림할 수 있다.

밀착세포단계는 다음과 같습니다.

1) 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤세한다.

2) 소화액 1mL (0.25% Trypsin-0.53mM EDTA) 을 배양병에 넣고 배양함에 넣어 1min 소화시킨 후 현미경으로 세포의 소화 상태를 관찰하여 세포가 대부분 둥글게 변하고 탈락하면 신속하게 조작대로 가져가 배양병을 몇 번 두드린 후 혈청 10% 를 함유한 6ml를 첨가한다배양기소화 중지;

3) 세포를 가볍게 불어 떨어뜨린 후 원심관으로 빨아들이고, 1000rpm 원심 5-8min, 맑은 액체를 버리고 1-2mL 배양기를 보충한 후 고루 분다;

4) 5-6mL의 각 병에 배지를 보충하고, 세포현액을 1:2의 비율로 새로운 5-6mL의 배지를 함유한 6cm 배지 또는 T25 배지 병에 나눈다.

(즉, T25병 1개는 T25병 2개 또는 6cm 배양접시 2개로 대물림)

부유세포전대 절차는 다음과 같다.

1. 반환액법

반환액 처리, 세로배양병은 배양함에 1시간 정도 정적하여 3ml 정도의 배양기를 가볍게 빨아들인 후 3ml의 배양기를 보급한다. 배양기의 변색이 느리면 500ul 정도의 FBS를 직접 추가할 수 있다. 대물림할 때 5ml의 배양기를 직접 보급하여 두 개의 배양병으로 나누어 배양할 수 있다. 일반적으로 이렇게 세 번 정도 대물림하면 원심에서 한 번 대물림하여 죽은 세포를 제거할 수 있다.

2. 원심환액법

만약 분병이 필요하다면 세포현액을 원심관 중 1000rpm, 원심 5min에 수집하여 상청을 버리고 1-2mL의 배양액을 보충한 후 중현을 혼합한 후 세포현액을 1:2의 비율로 새 T25병에 나누고, 6-8ml의 설명서에 따라 배치한 새로운 배양기를 첨가하여 세포의 생장 활력을 유지하며, 후속 전대는 실제 상황에 따라 1:2~15의 비율로 진행할 수 있다.

B,세포 동존:

1. 세포가 배양병을 덮는 80% 면적까지 성장하면 T25 배양병의 배양액을 버리고 PBS로 세포를 한 번 세척한다.

2. 0.25% 소화액을 약 1ml 첨가하여 배양병에 넣고 현미경을 거꾸로 놓고 관찰한 후 세포가 축소되어 둥글게 변한 후 5ml 배양액을 첨가하여 소화를 종료한 후 다시 세포를 가볍게 불어 떨어뜨린 후 현액을 15ml 원심관으로 전이한다. 1000rpm 원심 5min;

3. 상청을 버리고 침전세포에 1ml의 야지생물무혈청동존액 (화물번호: C7001) 을 첨가하여 혼합한후 동존관에 첨가한다.

4, 냉동 저장 세포를 직접 -80 ℃ 냉장고에 넣으면 된다. 만약 후기에 세포를 액체 질소 탱크에 넣으려면-80℃ 냉장고에 있어야 돼요.중24시간 이상 보관다시 액체 질소 탱크로 들어가다.

C,세포 소생:

1, 액체 질소에서 세포 냉동 보관관을 제거 (보호 착용 주의마스크), 빨리 넣기 37 ℃ 의 수욕에서 해동하여 동존관에 결정이 없을 때까지 해동한 다음 75% 의 알콜로 동존관 외벽을 닦는다.

2、냉동 보관관의 세포를 함유로 옮기다 5ml 배지의 15ml 원심관 중 1000rpm 원심 5min;

3、상청을 버리고 침전용 5ml 배양기 중상, 접종T25 배양병까지37 ℃, 5% CO₂세포 배양 상자에서 배양하기;

4, 다음 날, 신선한 배양기로 바꾸어 계속 배양한다.

참고 사항:어떤 세포는 벽에 잘 붙지 않아 운송 과정에서 세포가 쉽게 탈락하는 것이 정상적인 현상이다.많이 이탈하면 배양병의 모든 배양액을 원심관에 수집, 1000rpm 원심 5min,수집 상청과도 배양을 하다(후기 대비 배양), 침전 1-2ml를 넣고 가볍게 불며 다시 매달아 1-2분 소화한 후 배지 5ml를 넣어 반응을 종료한다.다시 원심을 분리하고, 상청을 버리고, 1-2ml 배지 중서스펜션을 추가합니다.그런 다음 1: 2 비율로 병을 나누어 대물림 (두 개의 T25) 하고 새로운 배양기를 5-8ml/병까지 보충한 후 마지막에 넣는다37℃, 5%CO₂세포 배양 상자에서 배양하다.

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