Fluo-8 AM, Cell Permeant 칼슘 이온 형광 프로브

Fluo-8 AM, Cell Permeant 칼슘 이온 형광 프로브

제품 소개

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity），현재 가장 밝은 가시광선 자극 파장 Ca2 + 형광 프로브로, 형광 강도는 Fluo-4보다 두 배, Fluo-3보다 네 배 강하다.Fluo-8 중간 정도의 Ca2+ 친화력, 거의 근접Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），사용은 Fluo-3 및 Fluo-4와 거의 동일합니다.Fluo-8은 Fluo-3, Fluo-4의 편리한 스펙트럼 검출 특성을 유지할 뿐만 아니라 Ca2+와 결합한 최대 자극 파장은 490nm, 최대 발사 파장은 514nm이다. 또한 개선된 세포 로딩과 Ca2+ 응답 능력을 갖추고 있다.Fluo-8 로더는 약한 온도 의존성을 가지고 있으며, 실온이나 37 ℃ 에서 부화하면 모두 염색이 양호하며, Fluo-3와 달리 Fluo-4는 37 ℃ 에서 부화하도록 엄격히 요구하며, 이 특징은 HTS 고전통량 선별 실험에 더 적합하게 한다.Fluo-8은 광범위하게 사용되며 많은 세포계 및 표적 샘플과 호환되며 배합체 또는 표적 자체의 신호에 의해 방해받지 않습니다.

Fluo-8은 레이저 공초점 현미경, 유동식 세포계, 형광 효소 표시기, 형광 현미경 등을 통해 포내 칼슘 이온 수준의 변화를 측정할 수 있다.Fluo-8, AM은 Fluo-8의 아세트메틸 유도체로 세포막 침투성이 있어 간단한 배양만으로 쉽게 세포에 들어갈 수 있다.일단 세포 안에 들어가면, 그 내에스테르 효소에 의해 절단되어 막 침투성이 없는 Fluo-8을 생성하여 포내에 머물러 상응하는 생리 기능을 발휘한다.

본 제품은 50ug 소포장의 동결건조분 형태로 세포 내 Ca2+ 수평검사 시 권장농도 1-5uM.

Fluo-8 AM, Cell Permeant 칼슘 이온 형광 프로브

기본 기능

동의명: Fluo-8, 오전

분자식: C50H50N2O23

분자량：1046.9316

용해성: DMSO(1-5 mM)에 녹는다

Ex/Em은: 490/514nm(Ca2+ 결합);

저장 조건: -20 ℃ 건조에 보관하고 1년 유효기간.

Fluo-8 AM, Cell Permeant 칼슘 이온 형광 프로브

사용 방법

A 시약 준비

1) Pluronic F-127 모액 조제: Pluronic F-127 분말 100mg (화물번호: Cat No. FS0432) 에 500ul DMSO를 첨가하여 20% (W/V) 모액으로 조제한다고 한다.용해 과정은 40-50℃에서 20-30min로 가열해야 한다. 용액은 실온에서 보관하며 냉장 보관할 필요가 없다.만약 결정이 석출되면 다시 가열하여 용해할 수 있어 사용에 영향을 주지 않는다.

2）HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3)아니면 다른 생리 완충액

B 작업 단계

1) 무수 DMSO로 Fluo-8을 녹이고 AM은 1-5mM의 저장액으로 조제하거나 이미 배합된 Fluo-8, AM 저장액을 실온에서 꺼내 온도를 회복한다.(예: 4mM의 모액으로 조제하려면 50ugFluo-8, AM에 11.9ul 무수 DMSO를 넣어야 합니다.)

2) HHBS나 기타 생리완충액인 Fluo-8, AM+DMSO 저장액으로 1-10uM의 작업액으로 희석하여 미리 20% Pluronic F-127 용액을 첨가하여 종농도를 0.02% 로 한다.

[참고 (1)]: Fluo-8, AM이 대부분의 세포에 적용하는 권장 로드 농도는 4-5uM이며, 구체적인 사용 농도는 실험 요구에 따라 최적화되어야 한다.과부하로 인한 세포독성을 피하기 위해서는 결과를 얻은 기초에서 될수록 zui 저탐침농도를 사용하는것을 권장한다.

[참고 (2)]: Fluo-8, AM 작업액은 즉시 배합하여 사용해야 하며, 반복적인 동존을 피해야 한다.

참고 (3): Pluronic F-127은 Fluo-8, AM이 용액에서 중합되는 것을 방지하고 탐침이 세포에 더 잘 들어가도록 촉진합니다.그러나 Pluronic F-127은 Fluo-8, AM의 안정성을 떨어뜨리기 때문에 작업액을 조제할 때만 넣는 것이 권장되며, 저장액을 넣어 장기간 보관하는 것은 권장되지 않는다.

3) 【선택 사항】 세포 내에 기음이온 운반체가 함유되어 있다면, 프로베네시드 (Probenecid, 1-2.5mM) 또는 술피리논 (Sulfinpyrazone, 0.1-0.25mM) 은 세포 배지 내에 첨가하여 에스테르화 탐지기의 유출을 줄여야 할 수 있다.

【주 (1)】: 아크릴술폰이나 술폰피리논 저장액은 상당히 알칼리성이 강하기 때문에 배양기를 넣은 후 pH를 재조정해야 한다.

4) 준비된 Fluo-8, AM 작업액을 세포에 첨가하고 첨가량은 피복세포를 기준으로 한다.37℃ 또는 실온부화 20-60min.

[주(1)]: 부화시간에 관하여 만약에 첫ci가 실험을 하여 확정할 수 없다면 먼저 30min을 부화시켜 형광효과를 보는 것을 권장한다.세포 사멸이 많으면 시간을 적당히 단축한다.형광의 강도가 너무 약하면 적당히 시간을 연장한다.

[참고(2)]: 탐침의 적재 온도를 낮추면 탐침의 구실화 현상이 낮아질 수 있습니다.

5) 염색 작업액을 흡입하고 HHBS나 기타 생리 완충액 (필요한 경우 2.5mM 아크릴 술폰산과 같은 운반체 억제제를 함유한 완충액) 으로 교체하여 여분의 탐침을 제거한다.

6) 레이저공초점, 유식세포계, 형광효소표시기 등 적당한 기구로 파장Ex/Em=490/520nm로 검측한다.

[주 (1)]: Fluo-8, AM이 포내에 진입한 후 에스테르 효소의 분해를 거쳐 Fluo-8이 형성되며, 공급가의 결합 형식으로 세포질 내에 체류하는 것이 아니다.따라서 염료를 적재한 살아있는 세포를 고정 처리하고 Ca2+ 수평으로 들어가 검사할 수 없다.

주의사항

1) 형광 염료는 골고루 담금질하는 문제이므로 가능한 한 빛을 피하여 형광 담금질을 늦추십시오.

2) 아세트옥시메틸(AM)은 습기를 잘 흡수하므로 냉장고를 꺼낸 후 건조한 환경에서 실온에 두었다가 개봉하십시오.시약이 미량이기 때문에, 개봉하기 전에 가루가 파이프 바닥에 떨어질 수 있도록 잠시 원심을 분리해 주십시오.

3) Fluo-8, AM은 4 ℃, 빙욕 등 낮은 온도에서 응고되어 원심관 밑, 또는 관벽 또는 관뚜껑 안에 붙게 되며, 20-25 ℃ 에서 잠시 온육하여 전부 용해된 후 사용할 수 있다.

4) Fluo-8, AM은 처음 사용하며, 저장액을 현재 배합하여 사용하는 것을 권장하며, 1회 용량으로 나누어 포장하고, ≤-20 ℃ 의 밀봉 건조 냉동 보관을 엄격히 하여 습기를 방지한다.좋은 실험 효과를 보장하기 위해서 가능한 한 짧은 시간 내에 사용하도록 한다.

5) 귀하의 안전과 건강을 위해 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.