고양이 컵형 바이러스 검사 시약함

고양이 컵형 바이러스 검사 시약함포장 사양: 25T/박스 & 50T/박스

【검사원리】

고양이 컵형 바이러스 검사 시약함이 시약함은 이 유전자에 대해 특이성 유인물과 분자 비콘 탐지기를 설계하여 검사 대기 샘플에 이 DNA가 함유되어 있는 상황에서 PCR 반응이 진행되어 형광 신호를 방출할 수 있다.기기를 이용하여 PCR 과정 중 상응하는 형광 신호를 실시간으로 모니터링하고 출력하여 검측 결과의 정성 분석을 실현한다.

[주요 구성 성분]

[저장조건 및 유효기간] 피광-20 ℃ 이하로 보존하고 반복적으로 얼지 않도록 하며 유효기간은 12개월이다.

[적용 기기] ABI 시리즈, Bio-Rad 시리즈, Agilent Stratagene MX 시리즈, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Rotor-Gene 시리즈, 항저우 보일 시리즈 등 다중 채널 실시간 형광 정량 PCR 기기.

【견본 요구】

1. 원본 표본을 사용하여 검측하는 경우.표본 (환자의 뇌척수액, 정맥혈, 관절액, 병축정맥혈, 유즙, 균락, 균태 등) 은 신선하게 채집하고 쌍증멸균수 또는 멸균생리염수를 사용하는 부유한 원시표본이어야 한다.

2.만약 증균 후 PCR 검사를 진행해야 한다면, 선택적 증균액을 사용하여 원시 표본에 증균을 진행해야 한다.

3. 표본 수집 후 즉시 검측할 수 없으면 2~8 ℃ 에 보관하여 냉장하여 밤을 새워 보관할 수 있다;만약 장기간 보존할 필요가 있다면, 표본은 -20 ℃ 에서 -80 ℃ 로 얼려 보관해야 한다.

【검사방법】

1. 시약 준비(시약 준비구역)

(1) 냉장고에서 시약함을 꺼내고 시약함에서 실험에 필요한 시약을 꺼내 충분히 녹여 섞고 순식간에 원심을 분리하여 관벽에 부착된 액체를 제거한다.

(2) 당번 실험에 필요한 반응수(n)를 계산하고 아래 표에 표시된 반응체계에 따라 당번 실험에 필요한 각종 시약량을 계산한다.

n = 음성대조수(1T) + 양성대조수(1T) + 오차예비량(1T) + 표본수

(3) 무균원심관에 상술한 시약을 첨가하여 충분히 혼합한후 순식간에 원심을 분리한다.시약을 20μL/관 분장량에 따라 PCR 반응관에 분장한다.

(4) PCR 반응관 뚜껑을 꼭 닫은 후 PCR 반응관을 샘플 처리구역으로 옮긴다.남은 시약은 -20 ℃ 이하 냉장고에 다시 넣어 냉동 보관한다.

2. 샘플 준비 (샘플 처리 영역)

DNA/RNA 추출 시약함으로 핵산을 추출하면 되며, 구체적인 조작은 그 시약함 설명서에 따라 조작한다.

3. 샘플링

상술한 제조된 PCR 반응 샘플 튜브에 각각 처리된 측정 대기 표본 DNA 각 5μl, 최종 부피 25μl/튜브를 첨가하여 PCR 반응 뚜껑을 잘 덮은 후 순간 저속 원심분리하여 PCR 기기로 옮긴다.음성대조와 양성대조는 각각 5μL 시약함 자체의 음성대조 또는 양성대조품을 추가하여 종체적은 25μl/관으로 PCR 반응뚜껑을 잘 덮고 혼합한 후 순식간에 저속으로 원심을 분리하여 PCR 기기로 옮긴다.

4. PCR(PCR 확장 영역)

(1) 샘플처리구역에 준비된 PCR반응관을 취하여 실시간 형광정량PCR기 샘플홈의 상응한 위치에 배치하고 배치순서를 기록한다.

(2) 표를 눌러 기기의 핵산 증폭 관련 매개변수를 설정하여 PCR 증폭을 진행한다.

참고: ABI 시리즈 형광 PCR 기기는 설정 시 ROX 보정을 선택하지 않고 담금질 기단을 설정하여 None을 선택합니다.

[참조 값 (참조 범위)]

1. 시약함 유효성 판정:

(1) 양성대조: 전형적인 S형증폭곡선 또는 Ct값 ≤35가 있다.

(2) 음성대조: Ct값> 38 또는 Ct값이 없으며 선형은 직선 또는 경미한 사선으로 지수성장기가 없다.

2. 표본 결과 판정:

(1) 양성: 표본검사결과 Ct값 ≤ 35 또는 뚜렷한 지수성장기가 있다.

(2) 의심: 표본 검사 결과의 Ct 값은 35~38 범위 내에 있다.이때 표본에 대해 중복검사를 진행해야 한다. 만약 중복실험결과 Ct값이 여전히 35~38범위내에 있고 뚜렷한 지수성장기가 있으면 양성으로 판정하고 그렇지 않을 경우 음성으로 판정한다.

(3) 음성: 표본검사결과 Ct값> 38 또는 Ct값이 없다.

[검사 결과의 해석]

[검증 방법의 한계]

1.검사 샘플에서 검사 된 핵산 농도가 이 시약 상자보다 낮을 때 검출 된 가짜 음성의 결과가 발생할 수 있습니다.

2.피검사 샘플은 채집, 운송, 저장 및 처리 과정에서 조작 방식이 부적절하면 DNA가 분해되어 가짜 음성 결과를 낳기 쉽다.

3.샘플 수집, 운송, 저장 및 처리 과정에서 교차 오염이 발생하면 가짜 양성 결과를 쉽게 얻을 수 있습니다.

[제품 성능 지표] 제품의 검출 제한은 103 Copies/mL이며 제품 CV 값은 ≤ 3% 입니다.

【주의사항】

1.본 시약함을 사용하는 실험실은 국가 관련 부분에서 반포한 관련 유전자 증폭 검사 실험실 관리 규범에 따라 엄격히 관리해야 한다;

2.RNA 분해를 피하기 위해, 샘플 처리 과정은 0-4 ℃ 조건에서 조작해야 하며, 실험을 완료한 후 즉시 검사에 접속해야 한다;샘플 처리 과정에서 사용되는 기구 소모품은 무핵효소 처리를 거쳐야 한다;

3.각 구역의 물품은 모두 전용이다.오염되지 않도록 교차 사용해서는 안 된다;검사가 끝나면 즉시 작업대를 청소해야 합니다.

4.반응액을 흡수할 때는 기포가 생기지 않도록 해야 한다.PCR 기기에 오르기 전에 액체가 증발하여 결과가 정확하지 않도록 각 반응관이 꼭 닫혀 있는지 주의해서 검사해야 한다;

5. 시약함의 모든 시약은 사용하기 전에 상온에서 충분히 녹여 섞어야 하며 순간적으로 원심을 분리해야 한다.

6.시약함 안에 배합된 음성과 양성 대조는 1차 사용 전에 모두 표본 준비 구역으로 옮겨 따로 보관해야 한다;

7. 형광 방해를 방지하기 위해 나체로 PCR 반응관에 직접 접촉하는 것을 피하고 PCR 반응관에 어떠한 표시도 하지 말아야 한다.

8. 검사 과정에서 사용한 흡입헤드는 염소산이 10% 든 폐기물 실린더에 직접 맞아야 하며, 검사가 끝난 PCR 반응관은 뚜껑을 열지 말고 다른 폐기 물품과 함께 멸균한 후 버려야 한다;작업대 및 각종 실험용품은 정기적으로 염소산 10%, 알코올 75% 또는 자외선등으로 소독해야 한다.

계기 증폭 관련 파라미터는 본 설명서의 관련 요구에 따라 설치해야 한다.서로 다른 로트 시약은 혼용할 수 없다;유효 기간 내에 사용합니다.제품은 과학 연구에만 쓰인다.