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상해시 송강구 신진가 1111호 암크립톤광장 1A동 211호
제품 카테고리
상해 야지생물과학기술유한공사
개요
BxPC3；인원위 췌장선암세포 (STR): 상해 야지생물 주요경영제품: 세포, 세포계, 원대세포, ATCC 세포대리구매, Elisa시약함, 생화학시약함, PCR시약함, 면역조화시약함, 항체, 재조합단백질, 표준품 등 일반시약.신규 고객의 주문 문의를 환영합니다!
제품 정보
하나, BxPC3；인간원위췌장선암세포(STR)배양 조건
배양 조건 |
공기,95%；CO는2，5% ；37℃ |
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성장 특성 |
벽에 붙어 자라다. |
냉동 저장 조건 |
무혈청 동존액 |
전대 방법 |
1:2~1:3 |
전대 상황 |
2일 환액 |
비고 |
전5-8세대는 퓨린마이신(1-4ug/ml)으로 선별해 공고히 본 라이브러리의 세포는 과학 연구 업무에만 사용되며, 허가 없이 기타 목적으로 사용할 수 없으며, 사용자는 본 라이브러리의 세포를 제3자에게 양도할 수 없다. |
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2.BxPC3；인간원위췌장선암세포(STR)수거 후 처리
소생세포 처리 방법:좋은 상태로 배양한 후 배양액을 가득 채우고 병 입구를 봉하는 것이 세포를 운반하는 가장 좋은 방법이다.세포용 을 받다75% 알코올을 통째로 뿌려세포병，엄격 무균후세포병 을 배양함 에 넣고 가만히 두다세포 상태를 안정시키기 위해 2-4시간。정지 후현미경은 세포의 생장 상황을 관찰하고 세포를 다른 배수로 사진으로 찍어 보존한다 (최고40x, 100x, 200x 한 장씩)，3일 전 사진예중요한 판매 후 근거로 사진은 제공되지 않으며 기본적으로 수신 상태가 양호합니다.
냉동 세포 처리 방법:세포를 받은 후, 거품 상자 중의 드라이아이스가 남아 있는지, 냉동 보관소가 완전무결한지, 해동 상황이 있는지 관찰하고, 만약 드라이아이스가 기화되거나 냉동 보관소가 해동 파손 현상이 있는 것을 발견하면, 즉시 사진을 찍고 우리에게 연락하십시오.세포가 수령 서명한 지 3일 이내에 우리에게 연락하지 않으면 수령이 양호한 것으로 묵인됩니다.소생 제 1 관 활성 문제가 있으면 즉시 연락 주십시오. 기술자가 당신과 소통하고 지도한 후 소생 제 2 관,우리측과 연락하지 않고 제멋대로 소생하다. 제2관에 문제가 생기면 판매 후 판매하지 않는다.
세포 배양 절차
a 、세포 전대：만약초과 없음80% 합류도 때 병에 든 배양액을 원심관에 모아 배지 5ml를 남기고 37 ℃, 5% CO를 넣는다2부화상자 배양;세포 밀도가초80%, 대물림 배양 가능。
밀착세포단계는 다음과 같습니다.
1) 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤세한다.
2) 소화액 1mL (0.25% Trypsin-0.53mM EDTA) 을 배양병에 넣고 배양함에 넣어 1min 소화시킨 후 현미경으로 세포의 소화 상태를 관찰하여 세포가 대부분 둥글게 변하고 탈락하면 신속하게 조작대로 가져가 배양병을 몇 번 두드린 후 혈청 10% 를 함유한 6ml를 첨가한다배양기소화 중지;
3) 세포를 가볍게 불어 떨어뜨린 후 원심관으로 빨아들이고, 1000rpm 원심 5-8min, 맑은 액체를 버리고 1-2mL 배양기를 보충한 후 고루 분다;
4) 5-6mL의 각 병에 배지를 보충하고, 세포현액을 1:2의 비율로 새로운 5-6mL의 배지를 함유한 6cm 배지 또는 T25 배지 병에 나눈다.
즉,T25병 1개는 T25병 2개 또는 6cm 배양접시 2개로 대물림)
부유세포전대 절차는 다음과 같다.
1. 반환액법
반환액 처리, 수직 배양병은 배양함에 정적1시간 정도 배양기 3ml 정도를 가볍게 빨아들인 뒤 배양기 3ml를 보급한다. 배양기 변색이 느리면 FBS를 500ul 정도 직접 추가할 수 있다. 대물림할 때는 배양기 5ml를 직접 보급해 배양병 두 개로 나눠 배양할 수 있다. 보통 이렇게 3회 정도 대물림하면 원심에서 한 번 대물림해 죽은 세포를 제거할 수 있다.
2. 원심환액법
만약 분병이 필요하다면 세포 현액을 원심관에 수집할 수 있다1000rpm，원심 5min, 상청을 버리고 1-2mL의 배양액을 보충한 후 다시 매달아 섞은 후 세포현액을 1: 2의 비율로 새 T25병에 나누고, 6-8ml의 설명서에 따라 배치한 새로운 배양기를 첨가하여 세포의 생장 활력을 유지하며, 후속 전대는 실제 상황에 따라 1: 2~1: 5의 비율로 진행한다.
B,세포 동존:
1. 세포가 배양병을 덮는 80% 면적까지 성장하면 T25 배양병의 배양액을 버리고 PBS로 세포를 한 번 세척한다.
2. 0.25% 소화액을 약 1ml 첨가하여 배양병에 넣고 현미경을 거꾸로 놓고 관찰한 후 세포가 축소되어 둥글게 변한 후 5ml 배양액을 첨가하여 소화를 종료한 후 다시 세포를 가볍게 불어 떨어뜨린 후 현액을 15ml 원심관으로 전이한다. 1000rpm 원심 5min;
3. 상청을 버리고 침전세포에 1ml의 야지생물무혈청동존액(품번:C7001），골고루 섞은 후에 냉동 보관관에 넣어라.
4, 냉동 저장 세포를 직접 넣는다-80 ℃ 냉장고는 후기와 같이 충분하다해야세포를 액체 질소 탱크에 넣고칙필요-80℃ 냉장고중보관24시간 이상또액체 질소 탱크로 들어가다.
C,세포 소생:
1、액체 질소에서 세포 냉동 보관관을 꺼내 (주의착용보호마스크), 빨리 넣기 37 ℃ 의 수욕에서 해동하여 동존관에 결정이 없을 때까지 해동한 다음 75% 의 알콜로 동존관 외벽을 닦는다.
2、냉동 보관관의 세포를 함유로 옮기다 5ml 배지의 15ml 원심관 중 1000rpm 원심 5min;
3、상청 을 버리고 침전 하여 쓰다5ml 배지 중량, 접종다음T25 배양병,놓다다음37℃, 5%CO2세포 배양 상자에서 배양하기;
4、다음 날, 신선한 배양기로 바꾸어 계속 배양한다.
참고 사항:어떤 세포는 벽에 잘 붙지 않아 운송 과정에서 세포가 쉽게 탈락하는 것이 정상적인 현상이다.많이 벗어나면 배양병의 모든 배양액을 원심관에 수집,1000rpm 원심 5min,수집 상청과도 배양을 하다(후기 대비 배양), 침전 가입1-2ml，가볍게 불고 다시 매달아 1~2분 정도 소화한 뒤 배지 5ml를 넣어 반응을 종료한다.다시 원심을 분리하고, 상청을 버리고, 1-2ml 배지 중서스펜션을 추가합니다.그런 다음 1: 2 비율로 병을 나누어 대물림 (두 T25) 하고 새로운 배양기를 5-8ml/병까지 보충한 다음 37 ℃, 5% CO를 넣는다2세포 배양 상자에서 배양하다.
