인간 II형 폐포상피세포 브랜드

기관지 상피세포

1. 세포 기본 속성

배양기: FBS, 성장첨가제, Penicillin, Streptomycin 등 포함

환액 빈도: 2-3일에 한 번씩 환액

세대 간 특성: 2-3세대 가능

소화액: 0.25% 인슐린 백색 효소

배양조건: 기상: 공기, 95%;CO2，5%

세포 소개: 사람의 기관지 상피세포는 기관지 조직에서 분리된다.기관(Trachea), 호흡기의 일부;뒷벽이 약간 평평한 원통형 파이프 모양입니다.상단은 제6경추하연을 평평하게 하고 환상연골과 련결된다.아래쪽으로 제4, 5흉추체 (상당히 흉골각평면) 접경지대에 이르러 왼쪽, 오른쪽 주기관지로 나뉘며 갈라진 곳을 기관가지라고 한다.기관지는 주로 14~16개의 반환상연골로 구성되였는데 탄성이 있으며 연골은"C"자형의 연골환으로서 부족점이 뒤로 향하고 각 연골환은 인대로 련결되며 환후방의 부족점은 평활근과 치밀결단조직으로 련결되여 지속적으로 벌리는 상태를 유지하였다.관강은 점막을 받치고 표면은 섬모의 상피를 덮으며 점막에서 분비되는 점액은 공기중의 먼지알갱이에 달라붙을수 있으며 섬모는 끊임없이 인두부로 흔들어 점액과 먼지를 배출하여 흡입한 기체를 정화한다.기관지상피는 기도가 외부환경과 접촉하는 첫 방어선으로서 각종 병원체, 염증매체가 작용하는 표적세포일뿐만아니라 효과세포로 합성되고 여러가지 염성매체와 세포인자를 방출하여 기도의 염증 및 면역반응에 참여하게 된다.체외에서 배양된 원대기관 상피세포는 체내 조직과 형태 구조와 기능 활동에 있어 유사성이 크기 때문에 기초 및 임상 연구에서 매우 중요하다.

원대 세포 분리 배양의 사고방식:

취재--분리--배양--감정

먼저 조직을 기체에서 꺼내 인슐린백효소/콜라겐효소 처리를 거쳐 단세포로 분산한 뒤 적합한 배지에서 배양해 세포를 일정 계수까지 번식시킨 뒤 세포감정을 한다.

실험 단계:

1. 7-10d 수컷 SD 쥐를 취하여 경추가 탈구되어 죽고 75% 에탄올에 담가 3~5min 소독한다.

2. 초정화작업대에서 쥐의 부러진 머리를 유리배양그릇에 넣고 두개강을 열어본후 전뇌를 꺼내 예랭이 담긴 PBS유리배양그릇에 넣어 소뇌와 간뇌를 제거한다.

3. 뇌반구를 마른 여과지에 천천히 굴려 연뇌막과 뇌막의 큰 혈관을 제거한 다음 예랭이 담긴 새로운 PBS 유리배양그릇에 넣는다.

4. 세밀한 해부핀셋으로 대뇌의 백질, 잔여 대혈관과 연뇌막을 제거하고 대뇌피질을 보존한다.

5. 대뇌피질은 DMEM에 넣고 약 1mm3 크기로 잘라 50ml의 원심관에 넣고 혼합효소액 I (0.05-0.1% II형 콜라겐효소, 0.025-0.05% IV형 콜라겐효소, 200-400U DNaseI) 를 첨가하여 혼합한 후 37 ℃ 수욕소화 1-1.5h.

6. 실온 1000×g 원심분리 8min, 청액 올리기.

7. 침전에 20% BSA 중부상, 충분히 혼합, 1000 × g, 20min, 4 ℃ 원심분리, 상청 제거.

8. 침전에 4ml 혼합효소액 II(0.05-0.1%의 콜라겐효소/분산효소, 0.05-0.1% I형 콜라겐효소, 100-300U DNaseI)를 첨가하여 중부상, 혼합, 37 ℃ 수욕소화 0.5-1h, 700 ×g 실온원심분리 6min, 청액 제거.

9. 침전은 DMEM 배양액 2ml를 첨가하여 부유 혼합하여 원심을 거쳐 연속 경도를 형성하는 12ml 50% Percoll(25000×g, 60min, 4℃), 1000×g, 4℃ 원심 10min에 깔린다.

10. 하단에 가까운 적혈구층 위의 백황색의 층면은 바로 순화된 미세혈관구간으로서 흡출후 DMEM은 두번 (원심분리 1000×rpm, 6min, 실온) 헹구고 청액을 제거한다.

DMEM 배양액(20% FBS, 4ug/ml)을 첨가하여 중부상하고, 5% 를 함유한 쥐의 혈청 37 ℃ 를 부화시켜 밤을 새워 만든 세포배양접시에 접종하여 37 ℃, 5% CO2 배양함에 넣어 24h 동안 정지배양한 후 불함유 혼합배양기를 교체한 후 격일로 액을 교환한다.

참고 사항:

1.배양은 4℃ 조건에 기초하여 3~6개월간 보존할 수 있다.

2. 세포 배양 과정에서 무균 조작을 유지하도록 주의하십시오.

3.대대로 배양하는 과정에서 yi 효소의 소화 시간이 너무 길어서는 안 된다.그렇지 않으면 세포 밀착 및 그 성장 상태에 영향을 줄 수 있다.

4.고객이 세포를 받은 후 처음 3일 동안 배수당 각각 몇 장의 세포 사진을 찍어 세포 상태를 기록하여 기술부와 쉽게 소통할 수 있도록 건의한다;운송의 원인으로 인해 개별 민감한 세포에 불안정한 상황이 발생할 수 있으니, 즉시 우리에게 연락하여 우리의 기술자가 문제가 해결될 때까지 추적하고 답방할 수 있도록 세포의 구체적인 상황을 상세히 알려주십시오.

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