액상 크로마토그래피 기둥

액상 크로마토그래피 기둥

액상 크로마토그래프의 시스템은 액체 저장기, 펌프, 샘플링기, 크로마토그래프 기둥, 검측기, 기록기 등 몇 부분으로 구성된다.액체 저장기의 유동상은 고압 펌프에 의해 시스템에 들어가고, 샘플 용액은 샘플을 통해 유동상에 들어가고, 유동상에 의해 크로마토그래프 기둥(고정상) 안에 로드된다. 샘플 용액 중의 각 조는 두 상에서 서로 다른 분배 계수를 가지기 때문에, 두 상에서 상대적인 운동을 할 때, 여러 차례 반복되는 흡착-흡착의 분배 과정을 거쳐 각 조는 이동 속도에서 비교적 큰 차이가 발생하기 때문에 단일 크로마토그래프로 분리되어 데이터 검측량기로 전송된다.

원리구조

[1] 액상 크로마토그래피 기둥의 구조:

a 、빈 기둥은 기둥 이음매, 기둥 파이프 및 필터로 조립되어 있다

기둥 이음매는 저사체 구조로 되어 있으며, 기둥 이음매는 양쪽 끝의 스레드 어셈블리로 한쪽 끝은 7/16인치 내부 스레드이고 다른 한쪽 끝은 3/16인치 내부 스레드 (국내외 규범화) 이다.7/16인치 내부 나사는 1/4인치 기둥 파이프(Φ6.35mm)와 연결되며, 중간에 압환을 배치하여 밀봉에 사용한다.3/16인치 내부 나사는 1/16인치 (Φ1.57mm) 의 연결 파이프와 연결되어 있으며, 중간에 기둥 이음매의 밀봉에 사용되는 압환도 놓여 있다.기둥 외사 부피를 최소화하기 위해 크로마토그래피 기둥을 설치할 때 Φ1.57mm 연결관으로 빈 나사를 통해 고리를 누른 후 가능한 한 끝까지 꽂은 다음 빈 나사를 조여야 한다.압환은 공심나사에 의해 압출되여 변형된후 련결관에 단단히 묶여있다 (연결관이 압환을 통과한후 드러난 관의 길이는 엄격히 통제해야 한다.5mm 길이 또는 기타 고정 사이즈).

양쪽 끝의 기둥 이음매 안에, 기둥 파이프 양쪽 끝에 각각 스테인리스강 필터 (또는 필터망) 를 배치하여 기둥 충전재가 흐름에 의해 기둥 밖으로 튀어나와 유실되지 않도록 막는다.빈 기둥의 각 부품은 모두 316L 스테인리스강 재질로 일반적인 용제 작용을 견딜 수 있다.그러나 염화물을 함유한 용제는 그에 대해 일정한 부식성이 있으므로 사용시 기둥 및 련결관내에 이런 용제를 장기간 보존하여 부식을 피면하지 않도록 주의해야 한다.

b 、기둥 충전재:

액상 크로마토그래피 기둥의 분리 작용은 충전재와 유동상 사이에서 이루어지며, 기둥의 분류는 충전재 유형에 따라 결정된다.정상 기둥: 실리콘을 기둥 충전재로 많이 사용한다.외형에 따라 무정형과 구형 두 종류로 나눌 수 있는데, 그 입자의 직경은 3-10μm의 범위 내에 있다.또 다른 종류의 정상 충전재는 실리콘 표면 결합인 CN, -NH2 등 관능단인 이른바 결합상 실리콘이다.반상주: 주로 실리콘을 기질로 하고 그 표면에 십팔알킬관능단 (ODS) 을 결합한 비극성충전재이다.무정형과 구형의 구분도 있다.

흔히 사용하는 기타 반상충전재는 또 키합C8, C4, C2, 벤젠기 등이 있는데 그 립자의 립경은 3~10μm 사이이다.충전제의 요구

자주 사용하는 크로마토그래피 기둥 충전제는 화학 결합 실리콘이다.반상크로마토그래피시스템은 비극성충전제를 사용하는데 18알킬규산결합규소를 상용하며 신기규산결합규소와 기타 류형의 규산결합규소 (예를 들면 시안기결합규소와 아미노결합규소 등) 도 사용한다.정상 크로마토그래피 시스템은 극성 충전제를 사용하며, 자주 사용하는 충전제는 실리콘 등이 있다.이온교환 크로마토그래피 시스템은 이온교환 충전제를 사용한다.분자 저항 크로마토그래피 시스템은 겔이나 고분자 다공성 마이크로볼 등 충전제를 사용한다.영이구체의 분리는 일반적으로 수성 충전제를 사용한다.

캐리어의 모양, 입자 지름, 구멍 지름, 표면적, 결합 기단의 표면 커버리지, 탄소 함유량 및 결합 유형 등과 같은 충전제의 성능과 크로마토그래피 기둥의 충전은 시제품의 보존 행위와 분리 효과에 직접적인 영향을 미칩니다.공경이 15nm(1nm=10Å) 이하인 충전재는 분자량이 2000보다 적은 화합물을 분석하기에 적합하며, 분자량이 2000보다 큰 화합물은 공경이 30nm 이상인 충전재를 선택해야 한다.다른 규정이 있는 것 외에, 분석 기둥의 충전제 입경은 일반적으로

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3μm~10μm 사이.입경이 더 작은 (약 2μm) 의 충전제는 흔히 미경기둥 (내경 약 2mm) 을 충전하는데 사용되며 미경기둥을 사용할 때 수액펌프의 성능, 샘플링 부피, 검측지 부피와 시스템의 사체적 등은 반드시 그와 일치해야 한다.필요하다면 크로마토그래피 조건도 적당히 조정해야 한다.그 측정결과에 대해 쟁의가 생겼을 때에는 품종 본문에 규정된 크로마토그래피 조건의 측정결과를 기준으로 하여야 한다.

온도 요구 사항

실리콘을 담체로 하는 일반키합고정상의 사용온도는 일반적으로 35도를 초과하지 않으며 분리효과를 개선하기 위해 크로마토그래피기둥의 사용온도를 적당히 높일수 있지만 60도를 초과해서는 안된다.

유동상의 요구

흐름상의 pH 값은 2~8 사이로 제어해야 합니다.pH 값이 8보다 크면 캐리어 실리콘을 용해시킬 수 있습니다.pH 값이 2보다 작으면 실리콘과 연결된 화학 결합은 쉽게 수해되어 떨어진다.크로마토그래피 시스템에서 pH 값이 8보다 큰 유동상을 사용해야 할 때, 고순도 실리콘을 담체로 하고 표면 커버리지가 높은 키합 실리콘 충전제, 포복 폴리머 충전제, 유기-무기 잡화 충전제 또는 비실리콘 충전제 등 알칼리에 강한 충전제를 선택해야 한다;pH 값이 2보다 작은 유동상을 사용해야 할 때, 큰 부피의 사이드체인이 공간 비트 저항 보호 작용을 일으킬 수 있는 이소프로필 또는 이소부틸이 18알킬 실리콘 결합 실리콘 충전제를 대체하거나 유기-무기 잡화 충전제 등 내산성 충전제를 선택해야 한다.

주의사항

크로마토그래피 기둥의 주효 및 보호 기둥

새로운 기둥을 받았을 때, 반드시 먼저 그 사용 설명을 보고, 그 다음에 기둥의 효과를 측정하고, 정기적으로 기둥의 효과를 측정하며, 새로운 크로마토그래프 기둥에서 얻은 크로마토그래프를 보존하고, 조건을 기록하며, 정기적으로 측정 기기의 스펙트럼 대역폭을 측정해야 한다.온라인 모니터링에 적용될 경우 크로마토그래피 기둥에 대해 온라인 물리적 보호 및 화학적 보호를 제공해야 합니다. 예를 들어 온라인 필터 설치, 자체 충전재 보호 기둥 및 사전 설치 보호 기둥 등이 있습니다.온라인 필터는 기둥 끝에 입자가 누적되는 것을 방지하는 역할을 하는데, 장점은 기본적으로 기둥 효과에 영향을 주지 않고 높은 기둥 효과가 필요할 때 자주 사용하며, 자주 교체되는 소모품은 필터와 개스킷 보호 기둥의 역할은 기둥이 화학적으로 오염되는 것을 방지하는 것이다.단점은 대부분의 보호 기둥이 크로마토그래피 기둥의 기둥 효과에 영향을 미친다는 것입니다. 특히 마이크로 기둥을 사용할 때 일반적으로 자체 충전재를 장착하는 보호 기둥이 사용됩니다.최근에 새로 나온 일부 보호 기둥, 예를 들면 S e n t r y-g u a r d 보호 기둥, 그것의 특징은 고품질, 고효율 충전재, 분석 기둥 효과 증가, 더러운 샘플에 대한 하중 능력이 크고, 보호 기둥의 수명을 연장할 수 있으며, 손으로 이음매를 조일 수 있고, 설치할 때 도구가 필요 없고, 시간을 절약하고, 심지를 교환할 수 있는 디자인, 각종 다른 충전재를 사용할 수 있으며, 주로 매우 더럽고 복잡한 샘플의 밑바닥을 너무 낮추거나 샘플을 너무 많이 추출하지 않는 등 생화학 효과를 적용할 수 있다.

크로마토그래피 기둥의 세척

만든 샘플에 대해 충분히 알고 있어야 한다. 이 샘플에 대한 세척 능력 zui가 강한 유동상으로 세척한다. 실리콘 기둥에 대해서는 먼저 메탄올로 극성 불순물을 씻은 다음 건조한 디클로로메탄과 정경탄 1000-20OraL로 순서대로 활성화한다. 키와 상주에 대해서는 일반적으로 메탄올 1메탄올 1수로 순서대로 세척한다. 각 크로마토그래피 기둥은 특정한 방법으로 세척한다.

크로마토그래피 기둥의 보관

보관하기전에 불순물과 소금을 제거하고 적합한 보관용제를 채용하여 크로마토그래피기둥침대의 마르지 않도록 하며 기계진동을 피하고 세균의 생장을 방지하며 보관온도에 주의를 돌려야 한다.

문제 해결

1. 기둥의 압력이 너무 높다

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미립자가 막힌 것 같습니다.주상팽창, 불가역흡착, 세균생장 등으로 인한.시스템 반압 문제일 수도 있는데, 예를 들면 댐퍼 막힘, 샘플링 막힘, 파이프라인 또는 연결구 막힘.온라인 필터 불결, 압력 센서 부정확성 등.

2. 기둥 효과가 낮다

크로마토그래피 기둥이 오염되었거나, 필터 조각이 부분적으로 막히거나, 크로마토그래피 기둥 내의 죽은 부피가 발생했을 수 있는데, 예를 들면 유동상 p H 값이나 구성이 적합하지 않아 고정상 손실을 초래할 수 있다.유동상의 급격한 변화는 고정상의 물리적 손상을 초래하고, 기계의 진동은 고정상에 균열이 생기며, 기둥 침대가 수축하거나 마르게 한다.

기기 연결의 문제일 수도 있다. 샘플링기, 검측기, 파이프라인, 보호기둥과 온라인 필터 등이 잘 연결되어 있는지 진지하게 검사한다. 크로마토그래피 기둥이 균형을 잘 이루지 못하고 샘플링량이 너무 많은 등의 문제일 수도 있다.

3. 중복성이 낮고, 피크를 벗어나지 않으며, 회수율이 낮다

크로마토그래피기둥이 오염되였을수도 있고 류동상pH값 또는 구성이 적합하지 않아 고정상손실을 초래하였을수도 있으며 견본용제가 다르거나 견본자체가 불안정하며 고정상극성이 너무 강하거나 류동상극성이 너무 약하다.아니면 비특이성 흡착이 발생하거나.또한 경도실험시 균형시간이 부족하고 온도파동, 류동상구성이 개변되며 견본용제가 다름에 따라 견본의 안정성이 좋지 않고 방법의 개발이 좋지 못하며 완충액의 산알칼리도가 적합하지 않거나 완충능력이 부족할수도 있다.

파이프라인 내 (용제병에서 펌프 입구까지) 에 기포가 없을 때까지 통로를 전환하여 Purge를 계속하고 사용할 모든 통로에 기포가 없을 때까지 계속합니다.

10. Pump 아이콘을 클릭하면 매개 변수 설정 메뉴가 나타나고 Pump Control 옵션을 클릭하면 Off가 선택되고 Ok를 클릭하여 펌프를 끄고 Purge valve가 닫힙니다.

11. Pump 아이콘을 클릭하면 매개 변수 설정 메뉴가 나타나고 Setup pump 옵션을 클릭하면 Pump 편집 화면으로 들어가서 Flow: 1.0ml/min을 설정합니다.

12. 펌프 아래의 병 아이콘을 클릭하고 그림과 같이 (2원 펌프의 경우) 용제의 실제 부피와 병 부피를 입력합니다.펌프의 부피를 입력할 수도 있습니다.Ok 클릭