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액상 크로마토그래프 (HPLC) 는 분석 실험실에서 자주 사용하는 테스트 기기 중 하나이며 점점 더 널리 사용되고 있습니다.이 기구는 사용 과정에서 각양각색의 문제가 발생할 수밖에 없으며, 측정된 데이터의 정확성과 기구의 정상적인 작업에 직접적인 영향을 줄 것이다.조작자가 만약 고장의 발생 원인을 이해할 수 있다면, 이러한 고장을 예방하고 제거하는 방법을 정확히 알 수 있다면, 기기를 정확하게 사용할 수 있고, zui는 기기의 성능을 최대한 발휘할 수 있다.오늘 우리는 액상 크로마토그래프를 사용할 때 주의해야 할 몇 가지 문제를 당신과 공유하려고 합니다.

성분 분석 시나리오 ⑥ 표면 분석 시나리오 ⑥ 샘플 전처리 시스템 ⓑ 표면 분석 시나리오 ⓑ 경도 테스트 ⓑ 역학 테스트 ⓑ 표준 샘플

1. 시험관을 사용하는 문제

1. 시험관의 청결 문제.액상 크로마토그래피 분석법은 매우 민감한 분석 방법으로, 만약 부정확한 시험관을 사용했기 때문에 시험 결과의 정확성에 영향을 줄 수 있다.예를 들어, 메탄올을 용제로 사용하여 시료를 용해할 때 사용하는 작은 시험관은 고무 마개로 뚜껑을 만들기 때문에 시료가 들어갈 때마다 시간을 고정시키는 간섭봉이 존재하는데, 후에 이 간섭봉은 메탄올이 고무마개를 담가 용해된 성분에 의해 생성되며, 유리 시험관으로 교체한 후 간섭봉이 제거되는 것으로 확인되었다.

2. 플라스틱 시험관의 용해 문제.최근 몇 년 동안 일회용 플라스틱 시험관은 시험자에게 큰 편리를 가져다 주었지만, 사용 과정에서 반드시 유기용제가 시험관에 용해되는 현상에 주의해야 한다. 이런 시험관을 이용하여 샘플을 추출할 때, 일부 유기용제 (예를 들면 lvfang 등) 는 관벽에 용해되는 현상이 있다. 이런 용해된 물질도 때때로 검측기에서 신호를 발생시켜 샘플의 측정을 방해할 수 있다.이때 같은 실험조건으로 먼저 시험해볼수 있는데 추출물이 함유되지 않았을 때 추출액이 검측기에 교란신호를 산생할수 있는가 없는가를 보아야 한다. 만약 교란신호가 확실히 존재한다면 유기용제에 견디는 유리시험관으로 바꿀수밖에 없다.

3. 시험관 벽에 측정된 샘플의 흡착 문제.이 문제도 주의를 기울여야 한다. 그렇지 않으면 테스트 결과의 정확성에 영향을 줄 수 있다. 치료제 모니터링 (Therapeutic Drug Monitoring, TDM) 에서 아미테린, 프로마진 등 일부 측정된 약물은 유리 시험관의 관 벽에 쉽게 흡착되기 때문에 조작 중 폴리프로필렌관을 채취하여 추출 중 흡착 현상의 발생을 방지하기 위해 이미 유효한 0.5% 의 아민을 사용하여 추출할 수 있다.

2. 샘플링 밸브를 조작하는 문제

현재 분석형 액상 크로마토그래프에서 자주 사용되는 샘플링 밸브는 7725형 샘플링 밸브로, 그 내부의 6통 밸브 구조로 샘플링 조작이 매우 편리하지만, 잘못 사용하면 문제를 초래할 수도 있다.예를 들어, 액상 크로마토그래피의 시험 과정에서 때때로 이상 크로마토그래피 봉의 출현 및 재현성이 좋지 않은 문제가 있을 수 있는데, 이는 주로 조작 방법이 부적절하여 발생한 것이며, 이러한 문제를 해결하려면 다음과 같은 몇 가지 방면에서 착수해야 한다.

1. 샘플링량의 제어.샘플링 밸브로 샘플링을 넣을 때 밸브 내의 샘플 링은 정량이다. (일반 분석형 샘플링 밸브의 샘플 링 부피는 20ul이다.) 샘플링을 넣을 때 샘플링 밸브에 주사된 샘플 용액은 샘플 링의 파이프 라인에서 지름 방향의 속도 경도 (즉, 파이프 샤프트가 파이프 벽의 액류 속도보다 빠르다) 가 있기 때문이다.따라서 샘플 링에 샘플 용액이 가득 차서 샘플 밸브를 사용하여 정확하게 정량하려면 샘플 링 부피의 2배보다 샘플 양이 더 많아야 한다.만약 주사기로 샘플의 양을 제어한다면, zui는 샘플 링 부피의 1/2의 양만 주사할 수 있으며, 이렇게 해야만 일부 샘플이 오버플로우에서 넘쳐 정량 분석의 오차를 초래하는 것을 방지할 수 있다.

2. 샘플링 밸브의 청결 문제.만약 샘플 링에 지난번 샘플을 넣었을 때 샘플의 잔류가 있다면, 필연적으로 다음에 주사한 샘플을 오염시킬 수 있으며, 이러한 현상의 발생을 방지하기 위하여 다음 절차에 따라 조작해야 한다: a. 샘플을 넣은 밸브는 2개의 위치, INJECT와 LOAD가 있다.먼저 LOAD 위치에 있을 때, 주사기로 유동상을 샘플 밸브에 주입하여 몇 번 세척하고, 매번 용량은 약 40ul; b. 그리고 샘플 밸브판 손을 INJECT 위치에 당겼을 때, 다시 유동상으로 몇 번 세척하고, 매번 용량은 여전히 40ul; c.zui 후에 샘플을 샘플 밸브에 주입한다.

상술한 절차에 따라 조작하면 샘플링밸브로 인한 오염을 피면할수 있어 교란봉을 제거하고 분석결과의 정확성을 높일수 있다.

3. 샘플링 밸브 넘침관의 막힘.때로는 샘플밸브의 넘침관이 막히는 현상이 발생하여 샘플밸브내에 샘플을 주사할 때 주사바늘이 밀리지 않는다.이 고장은 플러그 튜브가 막혀서 생긴 것이다.막힌 원인은 대부분 용해견본의 류동이 서로 소금용액을 사용하는데 그중의 소금이 류관의 배공포트에서 결정되였기때문이다.이때 작은 비커에 소량의 증류수를 담아 과류관구를 약간 담그면 포트에 있는 소금의 결정이 용해되고 고장이 제거된다.매번 샘플링이 완료된 후 증류수로 반복적으로 플러그 튜브의 염분을 모두 씻어내면 이 고장을 피할 수 있다.

3. 흐름상(MOBLLE PHASE)의 문제

메탄올과 아크릴은 액상 크로마토그래피 분석법에서 유동상을 조제하는 데 자주 사용된다.액상 크로마토그래피에서 자주 사용하는 시약은 높은 등급의 시약, 예를 들면 크로마토그래피 순수 시약이다.요구가 그리 엄격하지 않을 때 우급순은 심지어 순시약을 분석해도 사용할수 있다.액상 크로마토그래피 분석법에서 자주 사용하는 것은 자외선 검출기이기 때문에 기선 소음을 낮추고 분석 민감도를 높이는 것을 고려할 때 자외선 흡수가 적고 불순물 함량이 적은 크로마토그래피 순수 시약을 사용해야 한다.

1. 유동상의 여과.잘 배합된 유동상은 사용하기 전에 반드시 0.5um 공경의 마이크로필터로 여과해야 한다.이는 용액에는 육안으로 발견하기 어려운 미세한 입자가 많이 함유되여있기에 이를 려과하지 않으면 펌프구, 기둥머리의 려과기를 막게 되는데 이렇게 하면 류동상의 정상적인 통로를 막아 크로마토그래피기둥의 저항이 증가하고 기둥의 압력이 높아지며 기둥의 효률이 떨어지게 된다.이 경우 여과된 흐름상으로 바꾸고 막힌 여과기를 떼어내 질산수용액 20%에 담가 초음파 세척기로 20분간 세척해 여과기의 막힌 것을 제거해야 한다.

2. 유동상의 탈기.유동상은 사용하기 전에 반드시 탈기하여 가능한 한 유동상에 용해된 기체를 제거해야 한다. 그렇지 않으면 이런 기체는 기둥충전재의 성능을 떨어뜨리고 검측기의 신호에 큰 교란을 일으킬수 있다.탈기는 초음파 탈기, 진공 탈기, 질소 탈기 등 여러 가지 방법이 있다.진공 탈기법과 질소 기류 탈기법은 현재 Zui에서 자주 사용하는 탈기법이다.물과 메탄올이 섞이면 많은 양의 기포가 생기는데 탈기하지 않고 사용하면 기포가 크로마토그래프 기둥과 검출기에 들어가 분석 작업의 정상적인 진행에 영향을 줄 수 있다.

4. 크로마토그래피 기둥의 사용과 관리

크로마토그래프 기둥은 액상 크로마토그래프 주이의 주요 부품으로 측정된 물질이 잘 분리되고 측정될 수 있는지, 크로마토그래프 기둥의 성능이 결정적인 역할을 한다.그러므로 일상적인 사업에서 크로마토그래피기둥의 정확한 사용과 보수정비에 각별히 주의를 돌려 크로마토그래피기둥의 사용수명을 연장해야 한다.

1. 예비 기둥과 보호 기둥을 사용한다.펌프와 샘플링 머신 사이에 설치된 프리 기둥(pre-column)은 크로마토그래피 기둥의 흐름에 *의 균형을 제공하며 기둥 충전재에 파괴적인 성분이나 오염물이 크로마토그래피 기둥에 들어가는 것을 방지합니다.보호기둥(guard column)은 크로마토그래피 기둥에 단단히 흡착할 수 있는 그룹이 크로마토그래피 기둥에 들어가는 것을 막을 수 있으며, 보호기둥은 크로마토그래피 기둥의 충전재와 같아야 한다.사전 기둥과 보호 기둥은 크로마토그래피 기둥을 자주 교체하지 않고 자주 교체할 수 있어 크로마토그래피 기둥의 사용 수명을 연장할 수 있다.

2. 기체가 크로마토그래피 기둥에 들어가는 것을 방지한다.일부 크로마토그래피 기둥 (예: 젤 기둥) 은 기포가 들어가는 것을 허용하지 않는다. 그렇지 않으면 기둥의 효과가 떨어지거나 심지어 제거하기 어려운 미세한 기실을 형성할 수 있다.따라서 기포가 크로마토그래피 기둥에 들어가는 것을 방지하기 위해서는 반드시 탈기를 거친 유동상을 사용해야 하며, 다음 절차에 따라 크로마토그래피 기둥을 엄격히 설치해야 한다.a. 크로마토그래피 기둥 입구의 밀봉 나사를 분해하여 용매가 스며들었는지 관찰한다;b. 용매가 스며들면 크로마토그래피 기둥을 파이프라인에 연결하여 기포의 진입을 피할 수 있다.c. 만약 무용제가 스며들 때 크로마토그래피 기둥의 이 끝이 이미 공기에 들어갔음을 나타낸다. 이때 크로마토그래피 기둥의 출구단을 샘플 밸브에 연결하여 유동상으로 반대 방향으로 크로마토그래피 기둥을 씻어 기둥 안의 공기를 제거할 수 있다.0.2ml/min의 작은 유량으로 크로마토그래피 기둥을 헹구는데, 용제의 유속이 너무 빠르거나 압력이 갑자기 상승하면 기둥의 성능이 저하될 수 있다;d. 만약 유출된 용제에 기포가 함유되어 있지 않다면, 기둥 안의 기체가 이미 배출되었다는 것을 설명하고, 다시 크로마토그래피 기둥을 정확한 방향으로 연결하면, 기포가 크로마토그래피 기둥 안으로 들어갈 수 없다.

3. 크로마토그래피 기둥의 세척.측정된 물질과 불순물이 크로마토그래피 기둥에 머물지 않도록 매번 샘플 분석 작업이 완료된 후에는 즉시 크로마토그래피 기둥을 세척해야 한다.우선 측정된 시료에 대한 세척 능력이 강한 용제로 크로마토그래피 기둥을 세척해야 한다. 분석 작업에서 자주 사용하는 반상 크로마토그래피 분석법을 예로 들면, 먼저 유출된 물질이 극성이 큰 물질이기 때문에 이때 메탄올 100%를 적용하거나 이소프로필렌, 테트라하이드로푸란 등 극성이 약간 약한 용제를 사용하여 기둥 안에 흡착된 극성이 작은 물질을 세척하면 세척액의 일반 용량의 20배가 된다.만약 유동상이 완충용액이라면 먼저 증류수로 크로마토그래피기둥을 씻어 기둥내의 소금을 씻어낸후 다시 적합한 용제로 씻어야 한다.

젤 필터링 크로마토그래피 (Gel Filtration Chromatography) 에 사용되는 젤 기둥은 종종 완충 용액을 유동상으로 사용하며, 사용 후에는 당연히 증류수로 씻어야 한다.연속적인 작업의 경우 완충용액을 기둥 안에 넣어 하룻밤을 지낼 수 있지만 작은 유속(<0.5ml/min)을 유지하여 완충염의 석출을 방지하고, 유동상에 할로겐화물이 함유되어 있으면 하룻밤이라도 증류수로 크로마토그래피 기둥을 깨끗이 씻어 기둥에 대한 부식을 방지해야 한다.

4. 크로마토그래피 기둥의 보관.크로마토그래피 기둥이 일시적으로 사용되지 않는 경우 다음 사항에 주의해야 합니다.

a. 며칠 동안의 단기 방치는 먼저 용제로 크로마토그래피 기둥을 씻어야 한다(예를 들어 겔 기둥은 증류수로 씻는다). 그리고 크로마토그래피 기둥의 두 끝을 밀봉 나사로 밀봉하면 된다.

b. 크로마토그래피 기둥을 장기간 사용하지 않으면 상술한 방법만으로 처리하면 안 된다. 이때 크로마토그래피 기둥 사용 설명서에 명시된 용제를 사용하여 크로마토그래피 기둥을 가득 채워야 한다. 반상주는 일반적으로 메탄올을 사용하고 정상주는 메탄올이나 경탄을 사용하며 겔주는 물을 사용할 수 없다. 기둥 안에 미생물이 자라면 기둥의 효과가 떨어지기 때문에 이때 0.05% 의 NaNs 수용액을 사용하여 크로마토그래피 기둥을 다시 봉한다.크로마토그래피 기둥을 장기간 방치할 때, 반드시 크로마토그래피 기둥의 양쪽 끝을 엄하게 봉하여 용제의 휘발로 인한 기둥 충전재의 간축 현상을 방지해야 하는데, 이는 기둥 효과의 심각한 저하를 초래할 수 있기 때문이다.

c. 크로마토그래피 기둥은 실온에 저장해야 하는데 0 ℃ 이하의 환경에 놓으면 기둥 안에 얼음이 얼게 되는데 이는 기둥의 효과도 떨어지게 된다.

5. 크로마토그래피 봉의 쌍봉 문제

장기간 사용한 크로마토그래피 기둥은 불순물이 들어오면 크로마토그래피 기둥 입구의 고정상을"판결"하게 하고 유동상으로 인한 고압 작용으로 기둥의 함몰을 형성하여 분석된 샘플이 그룹화된 정상적인 크로마토그래피 봉은 쌍봉으로 변하게 되는데, 이때 아래 서술한 방법에 따라 크로마토그래피 기둥을 복원할 수 있다.먼저 실린더의 단단한 너트를 아래로 돌리면 실린더 내의 고정상이 이미 압축되어 심하면 10mm 이상 축소될 수 있다는 것을 발견할 수 있다.이런 상황에서 우리는 바늘끝으로 류동상표층판의 매듭이 노란색으로 변한 부분을 후벼내고 같은 고정상으로 이 함몰구역을 평평하고 단단히 메우고 또 크로마토그래피기둥의 단단한 나사를 단단히 조여 복구작업이 곧 결속된다.복원된 크로마토그래피 기둥으로 샘플을 만들었을 때 크로마토그래피 봉은 정상으로 돌아왔다.

이상은 몇 가지 측면에서 크로마토그래프의 정확한 사용과 문제 해결 방법을 소개하였다.일상적인 업무에서 이러한 사항에 대해 진지하게 대처하고 문제가 있으면 제때에 해결할 수 있다면 기기의 정상적인 사용 기한을 크게 연장하고 기기의 성능을 zui가 최대한 발휘할 수 있다.