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Shanghai Jintong Instrument Co., Ltd
기초에서 진급까지: Leica 역방향 현미경 작동 지침
날짜:2025-07-18읽기 :0
라이카 역방향 현미경유연한 물경 배치, 다양한 샘플에 적합한 적재대 설계로 세포 배양, 조직 절편, 재료 과학 등 분야의 연구 이기가 되었다.그 조작기교를 장악하면 실험효률을 제고할수 있을뿐만아니라 계기의 수명도 연장할수 있다.다음은 기초 조작부터 진급 기교까지 단계별로 상세하게 설명한다.
1. 기초조작: 규범가동과 견본관찰
1. 전원 켜기 및 환경 준비
전원을 연결한 후 현미경 호스트 전원 스위치를 켜고 고글의 시야가 켜지면 형광 광원 (형광 관찰이 필요한 경우) 을 켭니다.참고: 형광 광원은 안정적인 광원 강도에 도달하기 위해 5-10 분 동안 예열하고 자주 스위치를 켜지 않도록 하여 램프의 수명을 연장합니다.
현미경 받침대를 안정된 상태로 조절하여 진동이 영상에 영향을 주지 않도록 합니다 (방진대나 두꺼운 고무 패드에 배치하는 것이 좋습니다).
2. 샘플 배치 및 초점 조절
배양접시, 다공판 또는 적재슬라이스를 적재대 중앙에 배치하여 견본이 물경의 바로 아래에 위치하도록 확보한다 (거꾸로 현미경 물경은 위를 향하고 견본은 위에서 배치한다).
먼저 저배율 물경 (예: 4X 또는 10X) 을 사용하여 굵은 초점을 조정합니다. 굵은 손잡이를 통해 물경을 샘플에 가깝게 천천히 떨어뜨리고 (터치하지 않도록 주의) 이미지가 선명할 때까지 반대로 천천히 회전합니다.고배율 물경 (예: 20X, 40X) 을 전환할 때는 다이얼을 미세하게 조정해야 하는데, 물경의 작업 거리가 짧기 때문에 조작이 더욱 가볍고 부드러워야 한다.
3. 광선로 및 영상 조절
집광경의 높이와 조리개 크기를 조절한다: 저배율 렌즈로 관찰할 때 집광경의 위치가 비교적 낮고 조리개가 커진다;고배율 렌즈의 경우 집광경을 높이고 조리개를 축소하여 대비도를 높여야 한다.
고글 관찰을 통해 두꺼운/세밀한 초점 조정 다이얼을 이미지가 가장 선명할 때까지 조정하여 과도한 초점 조정으로 물경이나 샘플이 손상되지 않도록 합니다.
2. 진급 기교: 기능 확장과 정확한 영상
1.형광 관찰 및 채널 전환
형광 영상이 필요하면 먼저 필터 블록이 DAPI, FITC, TRITC와 같은 대상 형광 채널로 전환되었는지 확인하고 현미경 측면의 필터 블록 회전판을 통해 조작합니다.
형광 자극 광의 강도를 조절한다: 너무 밝아서 형광 담금질을 초래하지 않도록 하고, 전압 조절 다이얼이나 소프트웨어 제어 (컴퓨터를 연결할 경우) 를 통해 신호가 선명하고 배경 소음이 낮을 때까지 점차 광의 강도를 강화할 수 있다.
2. 차이점과 DIC 이미지
차이관찰: 차이환 (물경과 일치해야 한다. 예를 들어 10X 물경은 10X 차이환에 대응한다.) 을 삽입하고 집광경 위상판 위치를 조절하여 무염색 샘플 (예: 살아있는 세포) 의 대비도를 강화한다.
DIC (미분간섭 대비) 관찰: DIC 프리즘을 설치하고 프리즘 편광 각도와 빛 강도 조절 다이얼을 조절하여 샘플의 미세 구조 (예: 세포 뼈대, 세포막 가장자리) 를 강조합니다.
3. 이미지 수집 및 매개 변수 최적화
디지털 카메라에 연결할 경우 Leica Application Suite와 같은 소프트웨어를 통해 노출 시간, 이득 값을 설정합니다. 고배율 거울에서는 노출 시간을 단축해야 합니다 (노출 방지). 살아있는 세포 이미징은 밝기를 높이기 위해 이득을 적절히 향상시킬 수 있습니다.
다중 채널 촬영 시 각각 명장, 형광 또는 차이 이미지를 수집하고 소프트웨어에 중첩하거나 비교 분석하여 매개변수가 일치하도록 확보해야 한다 (동일한 시야, 동일한 노출 시간).
3. 유지보수 및 주의사항
1. 대물렌즈 청소: 전용 렌즈지나 풍선을 사용하여 대물렌즈 표면의 먼지를 청소하고 렌즈에 직접 접촉하지 않도록 한다.액체가 묻으면 무수 에탄올로 가볍게 닦아낸다.
2.적재대 정비: 뾰족한 샘플이 적재대 표면을 긁지 않도록 하고, 사용 후 즉시 잔류 배지 또는 액체를 정리한다.
3.종료 프로세스: 형광 광원을 끄고 (실온으로 냉각한 후 전원을 꺼야 함), 대물렌즈를 저배 위치로 돌리고 (고배 대물렌즈가 장기간 압력을 받지 않도록 함), 마지막으로 호스트의 전원을 끕니다.
라이카 역방향 현미경의 조작은 기초초점조절로부터 진급영상까지 매 한걸음마다 규범과 세부사항을 고루 고려해야 한다.그 핵심기교를 장악하면 고품질의 영상을 고효률적으로 획득할수 있을뿐만아니라 더우기는 계기의 성능을 충분히 발휘하여 과학연구와 실험에 믿음직한 지원을 제공할수 있다.