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외비체 연구 케이스?Simple Western으로 테스트 효율성 2배 향상
날짜:2025-10-21읽기 :0
외비체(Exosomes)내체에서 파생된 소형 지질 나노 입자로, 직경이 약 30~200나노미터이며, 대부분의 살아있는 세포는 포토 작용을 통해 주동적으로 외비체를 분비한다[1]병리적으로든 생리적으로든 외비체의 방출은 지속적이거나 유도적일 수 있으며 방출 과정은 동적, 통제적, 기능적 관련성을 가진다.외비체의 분자 구성과 방출량은 그 유래 세포의 상태에 달려 있다.외비체는 다양한 세포계, 원대 배양물에서 분리해 얻을 수 있으며 혈청, 혈장, 타액 등 생물체액에서도 추출할 수 있다.출처의 다양성을 감안할 때 외비체는 다효적인 생리기능을 갖고있으며 갈수록 많은 연구에서 암, 감염성질병, 신경퇴행성질병 등 여러가지 병리상태에서 중요한 역할을 발휘하고있음을 보여주고있다.따라서 외비체는 액체 생검 방법의 관건적인 연구 대상이 되었다[2]또한 외비체는 공사 개조를 통해잠재력 있는 약물 배달 캐리어[3]。
외비체의 부피가 미소하기 때문에 복잡한 생물 기질에서 외비체를 분리하는 것은 매우 도전적이며 분리 생산량은 일반적으로 비교적 낮다.이러한 맥락에서Simple Western™외비체를 연구하는 이상적인 기술이 되었다: 이 방법은 3마이크로리터의 샘플만 필요하고 피크급 민감도를 갖추어 전통적인 Western blot의 필요한 외비체량에 대한 요구를 대폭 줄였다.그 후 외비체 관련 항원에 대한 특이성 검사 항체를 사용하여 표징 분석을 할 수 있다. 이러한 목표 항원은 외비체의 통용 표지물일 수도 있고, 그 출처 세포나 체액의 모든 표지물일 수도 있다.이 실험 방안에서 우리는 시판되는 외비체 표준품과 항체를 이용하여 Simple Western을 통과할 것이다™외비체를 검출하는 통용 표지물과 출처 특이성 표지물.
이번 글은'사람 혈장, 사람 혈청, 사람 A549 세포(폐포기저상피선암세포)'3종의 외비체 표준품을 대상으로 다음 표에 나와 있는 항체의 유효성을 검증한 결과를 소개한다.
01. 통용 외비체 표지물의 표현
• Flotillin-1: 클래식 공용 표지물로서 세 가지 표준품에서 모두 검출되었다(그림 1A).
• Alix: 세 가지 표준품 모두에서 발현되지만 A549 세포 유래 외비체에서 발현량이 더 높습니다 (그림 1D).
02. 출처 특이성 표지물의 표현
• Annexin V: 시체 표지자이자 혈액 항응고 단백질로 A549 세포, 혈장 유래 외비체에서는 검출되었으나 혈청 유래 외비체에서는 검출되지 않았다 (그림 1B).
• EGFR (HER1): A549 세포 유래 외비체에서만 검출되었으며 혈청, 혈장 유래 외비체에서는 신호가 없습니다 (그림 1C).
그림 1 Simple Western 활용™외비체 목표 항원을 측정하다.A：flotillin-1；B：Annexin V；C：EGFR；D：Alix。
03. 특수 처리 수요의 표지물
• CD63: 외비체 표준품을 PNGase F(탈당기화 효소)로 처리한 후에만 신호를 감지하여 당기화 수식이 이 표지물 검사에 미치는 영향을 제시한다 (그림 2).
04. 기타 표지물 검증
표 2의 나머지 항체 (예: Annexin A2, HSPA8/HSC70, TSG101 등) 는 모두 Simple Western 검증을 통해 대응 외비체 표준품에서 목표 신호를 감지할 수 있다 (그림 2).
그림 2. 혈장과 A549 세포 유래 외비체 표준품에서 각 목표 항원의 검사 채널 보기.
-- Simple Western 기술의 핵심 가치--
(1) 미량 효율성:3~5μL 외비체 분해액 (전통 WB는 50μL + 필요) 만으로 진귀한 샘플에 적합합니다.모세관의 전 과정은 샘플의 손실을 감소시켜 저풍도막단백질에 적합하다.
(2) 고감도: 피크급 검측 하한선, CD63/Alix 등을 측정할 수 있으며, PNGase F 처리를 통해 당기화 간섭을 해독하여 EGFR 등 특이성 검측을 실현한다.
(3) 항기질간섭: 12-230kDa 모세관 전영 잡다한 것을 제거하고, 외비체가 분해된 후 직접 기계에 탑승할 수 있으며, 번거롭고 순화할 필요가 없다.
(4) 다중정량: 단일 샘플은 동시에 8개의 표적점을 측정하여 MISEV 표준을 준수하고 동적 범위는 6개의 수량급을 커버한다.
(5) 자동화 프로세스: 3시간 전체 자동화 결과, 단백질 분해 감소;각 구멍은 독립적으로 품질 제어하여 외비 체제의 예비 QC를 만족시킨다.
(6) 정확한 정량: 절대/상대 정량을 지원하고, 낮은 샘플량 + 높은 중복성, 액체 생검 표지물 개발에 적합하며, 과학 연구에서 임상 전환을 가속화한다.
* 이 글은"ProteinSimple"위챗 대중번호에서 전재한다.
* 참조 문서:
1. 외체, D M Pegtel 및 S J Gould, 생화학의 연간 검토, 2019, 88:487-514.
2. 세포외 양포 – 암에서 세포 상호 작용체의 생물 표시자와 효과자, J Rak, 약학의 경계, 2013, 4:21.
3. 재구성 가능한 치료 시스템으로 외체, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari 및 I Mendes Pinto, 분자 의학의 추세, 2017, 23 (7) : 636-650.
▍ProteinSimple 정보:
프로테인심플은 미국 나스닥 상장사 바이오테크네그룹(NASDAQ:TECH) 산하 단백질 분석 브랜드다."단백질 분석을 더 간단하게하는 것"은 ProteinSimple의 비전입니다.ProteinSimple은 오랫동안 단백질 전하 표징, 단백질 순도 분석, 단백질 번역 후 수식 정량 검사, 디지털 Western Blot와 같은 단백질 면역 검사 기술과 같은 디지털 Western Blot, 고감도 마이크로 흐름 제어 다중 ELISA를 포함한 혁신적인 단백질 분석 도구의 개발과 생산에 전념하여 생물 제약, 세포 및 유전자 치료, 생물 의학 및 생명 과학 등의 과학자들이 단백질 분석 문제를 해결하고 약물 관계의 효율을 가속화하고 단백질 및 개발 효율을 향상시킵니다.ProteinSimple 화동대구 (강, 절강, 상해, 안휘, 산동) 의 수권대리상으로서 상해호확은 여러분들에게 ProteinSimple 산하의 계기설비를 제공하게 된다.
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