유전자 발현 연구에서 microRNA(miRNA)는 짧은 체인 특성(길이 약 22nt)으로 인해 일반적인 형광 정량 검사에 도전장을 던졌다.어떻게 정확하게 이런 미소분자에 대해 정량을 진행할것인가 하는것은 과학연구일군이 직면한 관건적인 문제이다.현재 주류의 기술경로는 줄기환법과 가미법으로 나뉘는데 두가지 방법은 각기 천추가 있는데 어느 경로를 선택하는가 하는것은 실험의 구체적인 수요에 의해 결정된다.

기술 원리로 볼 때, 둘 다 miRNA 반전록 유인물 설계의 난제를 해결하기 위한 것이다.근환법특수한 줄기 고리 구조를 가진 유인물을 사용하여 반전록을 진행하는데, 이 유인물은 miRNA의 3'단 특이성과 결합할 수 있으며, 그 줄기 고리 구조를 통해 반전록 산물의 길이를 증가시켜 후속 qPCR 증폭에 편의를 제공한다.핵심적인 이점은높은 특이성시퀀스의 고도의 동원을 효과적으로 구분할 수 있는 miRNA 가족 구성원은 단일 염기의 차이까지 식별할 수 있기 때문에 정량의'금 기준'으로 여겨진다.

그리고가미법다른 전략을 채택한다: 그것은 먼저 miRNA의 3'단에서 PolyA 중합 효소를 통해 아데노신 꼬리 (PolyA 꼬리) 를 한 꿰미 (PolyA 꼬리) 한 다음 범용 Oligo (dT) 유인물을 사용하여 반전록한다.이 방법의 특징은조작이 간편하고 통량이 많다, 한 번의 가미반응만으로 모든 miRNA를 반전시킬 수 있어 대규모 선별검사나 샘플량의 사전 실험에 적합하다.

실제 응용에서 선택의 관건은 균형에 있다특이성과 통량.연구 목표가 특정하고 알려진 miRNA를 검증하고 가족 구성원 간의 미세한 차이를 구분하는 데 엄격한 요구 (예: 질병 표지자 선별 검사) 가 있다면, 줄기 순환법은양호의 특이성은 더욱 온당한 선택이다.예를 들어, 관련 miRNA 형광 정량 검사 서비스에서 임상 연구 또는 기초 과학 연구에서 단일 유전자 발현 데이터의 절대적인 정확성을 보장하기 위해 기술 제공자는 종종 줄기 순환법을 우선적으로 추천합니다.

반대로 만약 연구가 전단계 발견단계에 처해있어 대량의 견본중 수백개의 miRNA의 표현스펙트럼을 동시에 검측해야 하거나 견본의 RNA총량이 극히 제한되여있다면 가미법은 그 조작절차가 짧고 필요한 RNA량이 적은 우세로 더욱 빨리 전역적인 표현수치개관을 제공할수 있다.

한마디로 줄기환법과 가미법은 대체관계가 아니라 상호보완적인 기술수단이다.현명한 선택은 실험목표에 대한 명확한 인식에서 비롯된다. 즉 단일한 데터의 정확성을 추구할것인가, 아니면 군체의 표현전모를 탐색할것인가.구체적인 수요를 결합해야만 믿을 만한 결과로 가는 정확한 경로를 선택할 수 있다.

miRNA 형광 정량 검사 서비스

제품 소개

Real Time PCR，즉 실시간 형광 정량 PCR은 정량 PCR 또는 qPCR이라고도 합니다.DNA 증폭 반응에서 형광 화학 물질로 매번 측정하는 것이다중합효소 연쇄반응(PCR) 순환 후 산물 총량의 방법.내삼 또는 외참법을 통하여 검체 중의 특정 DNA 서열을 측정하여 정량 분석하는 방법

정량PCR은 조작이 간단하고 빠르고 편리하며 민감도가 높고 중복성이 좋으며 오염률이 낮은 등 장점이 있어 의학검측, 약물치료효과심사, 유전자표현연구, 유전자변형연구, 유전자검측, 병원체검측, 동식물검측, 식품검측 등 각종 분야에 널리 응용되고 있다

실험 원리

실시간 형광 정량 PCR 기술이란 PCR 반응 체계에 형광 기단을 넣어 형광 신호 축적을 이용해 실시간으로 전체 PCR 프로세스를 모니터링하고, 마지막으로 표준 곡선을 통해 미지의 템플릿을 정량 분석하는 방법을 말한다.

실시간 형광 정량 PCR 기술 유형 개요: DNA 결합 염료법, 탐침 기반 화학법, 급멸 염료 도입법

실험 응용

DNA 및 RNA 정량;유전자 표현 검증;등위 유전자 감별;SNP 파팅병원체와 바이러스 검사;다중 PCR

실험 결과