제대간 충질 줄기세포(hUC-MSCs)는 신생아의 탯줄에서 추출한 다중 잠재력 분화 능력을 가진 줄기세포다.탯줄 유래 간충질 줄기세포는 간충질 줄기세포의 생물학적 특성 (표면 항원 표기물, 성골세포, 연골세포 및 지방세포로 분화하는 능력 있음) 을 유지할 뿐만 아니라 다른 유래 간충질 줄기세포에 비해 더욱 안전하고 원시적이며 세포의 증식, 분화 및 면역 조절 능력이 더욱 강하다.
이밖에 탯줄간 충질줄기세포는 또 취재가 편리하고 분리하기 쉬우며 면역원성이 낮고 도덕륜리문제의 제한이 없으며 획득할수 있는 세포수량이 많고 대규모표준화생산을 실현할수 있는 등 특징이 있어 광활한 림상응용전망을 갖고있다.본 제품은 엄격한 품질 관리와 검측을 거쳐 안전성과 유효성을 확보합니다.
(1) 세포밀도가 80~90% 에 달하면 대물림할수 있다 (세포가 너무 밀집되여서는 안되며 그렇지 않을 경우 쉽게 분화된다.) 배양상청을 버리고 칼슘, 마그네슘이온이 함유되지 않은 DPBS로 세포를 1~2회 윤세한다.
(2) 1mL를 첨가하여 인슐린을 배양병에 재조합하여 소화액을 모든 세포에 침윤시키고 37 ℃ 배양상자에 넣어 1-3min을 소화하며 현미경으로 관찰하여 세포의 대부분 세포가 동그랗게 변하고 탈락될 때까지 (세포상황에 따라 다름) 한다.
(3) 첨가 후 무균 원심관에 담고, 1000rpm 원심 5min, 3ml MSC 배지에 버리고 소화를 종료한다.가볍게 골고루 쳐서 맑은 액체를 올리고, MSC 배지 1-2ml를 보충한 후 골고루 불어준다.
(4) 1: 3 또는 1: 4의 비율로 전대하거나, 세포 계수 후 5-8 × 103cells/cm2 농도로 새로운 배양병에 접종하고, 해당 부피의 MSC 배양기를 보충한 후 37 ℃, 5% CO2 배양함에 넣어 배양한다.
(5) 2-3일에 한 번씩 액체를 바꾸고 2-4일까지 배양하여 세포의 성장밀도가 80% 정도에 도달하기를 기다리며 후속적인 전대 또는 동존 조작을 진행한다.
소화시간: 췌장 효소의 소화는 1분 정도로 조절해야 하며, 과도한 소화로 인한 세포 손상을 피해야 한다.
접종밀도: 바닥면적 1: 3에서 1: 4의 비율로 전대하여 과밀이나 과희를 피한다.
세대 차선택: 저세대 차세포 (예: P2세대) 를 사용하여 실험 효과를 보장하는 것을 권장한다.
전용배양기: 성장인자를 함유한 전용배양기를 사용하여 세포의 증식과 분화를 촉진한다.