혼합형 양이온교환기둥은 양이온교환과 반상크로마토그래프의 이중보존모식을 결합하였는데 그 조작방법은 두가지 메커니즘의 특성을 고루 고려해야 하며 구체적인 절차와 관건적인 요점은 다음과 같다.
1. 작업 전 준비
기둥 선택
목표 화합물의 성질(예를 들어 pKa값, 극성)에 따라 적합한 혼합형 기둥을 선택한다.예를 들어, 강산성 술폰산 기단 기둥은 pKa2-10의 알칼리성 화합물 (예: 아민류, 술폰아민류 약물) 에 적용됩니다.
기둥 기질 (예: 스티렌-디에틸렌 벤젠 공중합체) 과 기능 기단 (예: 술폰산 기단) 의 안정성을 확인하고 pH0-14 범위와 유기 용매에서 분해되지 않도록 한다.
장치 검사
HPLC와 같은 크로마토그래피 시스템의 유속, 압력 범위가 기둥 요구 사항과 일치하는지 확인합니다 (예: 스테인리스 기둥 최고 압력 4500psi, 유리 기둥 3000psi).
분석 기둥이 오염되거나 막히지 않도록 보호 기둥을 설치합니다.
시약 준비
산성 메탄올 용액, 레몬산 완충액과 같은 세척액을 조제하고 탈기, 여과 (0.2-0.5 μm 여과막) 하여 기포와 입자의 방해를 피한다.
활성 용매 (예: 메탄올, 물) 와 임세액 (예: 유기 용매 및 완충 소금을 함유 한 혼합액) 을 준비합니다.
2. 조작 절차
기둥 활성화
목적: 불순물을 제거하고 고정상이 충분히 용해되도록 하여 기둥의 효과를 확보한다.
방법:
메탄올(3~5배 주상부피, 유속 1-5mL/min)과 물(동일부피와 유속)으로 순차적으로 기둥을 활성화한다.
기둥을 장기간 사용하지 않으면 먼저 대량의 물로 씻은 다음 메탄올로 씻어 나중에 50% 의 메탄올을 함유한 수용액에 보관해야 한다.
견본상
목적: 목표물과 고정을 결합시키고 불순물이 흐름에 따라 흘러나오도록 한다.
방법:
시료 용액을 0.5-2mL/min의 유속으로 기둥을 천천히 통과하여 고정상에 균일하게 접촉하도록 한다.
만약 샘플의 농도가 너무 높다면, 기둥의 적재 능력을 초과하지 않도록 희석해야 한다.
림세제잡
목적: 목표물과 성질이 다르지만 기둥에 흡착된 불순물을 제거한다.
방법:
기계용제와 완충염이 함유된 림세액 (예를 들면 5% 메탄올수용액) 을 선택하는데 용량은 3~5배의 주상체적이고 류속은 1-3mL/min이다.
목표물이 씻겨지지 않도록 림프액 종류와 비율을 최적화해야 한다.
목표물 세척
목적: 목표물과 고정상의 상호작용을 파괴하고 세척액을 수집한다.
방법:
고농도 산/염기와 유기용제의 혼합액 (예: 산성 메탄올 용액) 을 세척액으로 선택하고, 용량은 2-4배 주상부피, 유속 1-3mL/min이다.
세척액을 수집하여 지나치게 세척하여 목표물의 손실을 초래하지 않도록 해야 한다.
기둥의 재생과 보존
목적: 기둥의 초기 상태를 회복하여 사용 수명을 연장한다.
방법:
먼저 대량의 물로 기둥을 씻은 다음 메탄올로 씻은 다음 최종적으로 50% 의 메탄올을 함유한 수용액에 보존하고 밀봉한후 적합한 온도에 두어야 한다.
기둥이 오염되면 1MNH ₄NO또는 이소프로필알코올 등 특수 용액으로 세척할 수 있다.
3. 관건적인 주의사항
유속 제어
유속이 너무 빨라 기둥 효과가 떨어지거나 고정적으로 유실되는 것을 피하고, 유속이 너무 느리면 분석 시간을 연장한다.
유속을 조정할 때는 점차적으로 변화하여 충전반이 교란하는 것을 방지해야 한다.
pH 및 온도 제한
극도의 pH(예를 들어 pH>6.5의 알칼리성 용제 또는 pH<2.5의 산성 용제)를 사용하여 실리콘 기질 기둥을 손상시키지 마십시오.
기둥은 실온에서 40 ℃ 이하로 사용하는 것이 좋으며 고온은 안정성을 낮출 수 있습니다.
세척액 선택
살리실산 등 분해 산물을 함유한 완충액 사용을 피하고 고정상 성질을 바꾸지 않도록 한다.
세척액은 미생물 오염이나 이온 강도 변화가 분리 효과에 영향을 주지 않도록 신선하게 조제해야 한다.
샘플 사전 처리
시료를 여과하여 과립의 불순물을 제거하고 기둥을 막는 것을 방지하다.
시료와 유동 상극성의 차이가 크면 파생화 또는 희석 처리를 해야 한다.
4. 응용 장면의 예
식품안전검사: 우유에서 멜라민(알칼리성 화합물)을 검출할 때 혼합형 약양이온교환 반상주를 사용하여 양이온교환과 반상보존 이중모드를 통해 효율적인 분리를 실현한다.
약물 분석: 혈중 알칼리성 약물 및 그 대사물을 분석할 때 혼합형 강한 양이온을 이용하여 반상주를 교환하는 이중 보존 메커니즘을 이용하여 분리 효율과 민감도를 높인다.
환경 모니터링: 수체 중의 알칼리성 오염물 (예를 들어 아민류 화합물) 을 검측할 때 세척 조건을 최적화하여 목표물의 신속한 세척과 정량 분석을 실현한다.