하나,wyatt 다각도 레이저 광 산란기테스트 전 준비

용매 준비

수상체계: 초순수 또는 조제염 용액(약 1L)을 사용하고 0.02% NaN 세균억제제를 넣어 0.22μm 여과막으로 여과한다.

유기상 체계: HPLC급 용매로 역시 0.22μm 여과막으로 여과(수입 시약은 실제 상황에 따라 처리한다.

샘플 준비

분자량 범위에 따라 농도(정량링 100μL)를 배합한다.

분자량 ~1000kDa: 0.5-1mg/mL

분자량 ~100kDa: 1-2mg/mL

분자량 ~10kDa: 3-5mg/mL

분자량 ~5kDa: 5-10mg/mL

시료는 0.22μm 또는 0.45μm 여과막으로 여과하거나 원심처리를 통해 불순물을 제거하고 가능한 유동상조제를 사용해야 한다.

계기 검사

전원 코드 연결, 전원 스위치 및 스위치 (네트워크 신호 연결용) 가 켜져 있는지 확인합니다.

2. 계기의 작동과 균형

전원 켜기 순서

펌프, 실린더 (온도 설정), 샘플링 시스템 (수동/자동 샘플링), 시차 또는 자외선 검출기, 점도 검출기, 다각도 레이저 광산란 검출기 전원 및 컴퓨터를 차례로 켭니다.

시스템 세척 및 밸런싱

펌프를 켜고 초순수로 시스템을 약 5분(purge 펌프)간 헹구고 purge 밸브를 닫는다.

최신 조립된 유동상 현상 시스템 (유기 체계는 유동상을 직접 사용한다) 을 사용한다.

0.1mL/min까지 유속을 조절합니다(점도 검출기에 접속한 경우 펌프를 켜기 전에 작업 인터페이스에 액세스해야 하며 IP & DP는 purge on 상태입니다).

시스템에 GPC/SEC 기둥이 연결되어 있지 않으면 0.1-1.0mL/min(점도 검출기가 없는 경우 분산 검출기 purge 밸브가 "Purge On" 상태가 되어야 함)으로 직접 유속을 조정할 수 있습니다.

시스템에 GPC/SEC 기둥이 이미 연결되어 있으면 0.1mL/min을 시작 유속으로 1~2분마다 0.1mL씩 증가하고 유속을 0.4-0.5mL/min으로 조정하여 시스템의 균형을 충분히 맞춰야 한다.

균형시간: 수상체계는 하루 앞당겨 씻고 균형을 맞추고 이튿날에 시험을 시작할것을 건의한다.유기상 체계의 균형 시간은 일반적으로 3-12시간이다.

3. 테스트 조작과 데이터 수집

시스템 밸런싱 및 베이스라인 안정화

시스템이 충분히 균형을 맞춘 후, 점차 유속을 시험 유속으로 조정한다.

시차 검출기의 Purge 밸브를 "Purge Off" 상태로 조절하고 신호가 안정되면 제로(Zero)로 돌아갑니다.

점도계(Visco Star) 작동 방법은 베이스라인이 안정될 때까지 첨부 파일을 참조하십시오.

시험 템플릿 호출

Astra 소프트웨어에서 해당 시험 템플릿을 호출합니다(설치 엔지니어가 만든 Template/Method 권장).

단일 핀 샘플링: File → New → Experiment from Template/Method → My Templates/methods, 해당 시험 템플릿을 선택합니다.

자동 샘플링기 샘플링: File → New → sample set Template/blank sequence → My Templates/method, 해당 시험 템플릿을 선택합니다.

샘플링 및 데이터 수집

샘플링 밸브를 load에서 inject 상태로 변경하여 샘플링 시스템을 통해 샘플링합니다.

Astra 소프트웨어는 자동으로 데이터 수집을 시작하며 데이터 수집이 완료되면 설정된 시간에 따라 소프트웨어가 중지되거나 수동으로 중지됩니다(Experiment→Stop).

데이터 저장

데이터 수집이 완료되면 File → Save as... 를 클릭하여 파일을 명명하고 저장합니다.

넷째,wyatt 다각도 레이저 광 산란기데이터 처리 및 보고서 보기

데이터 처리 프로세스

베이스라인 조정: Baseline을 두 번 클릭하고 LS 11 (90 ° 각도) 을 선택하고 베이스라인 끝을 조정하여 베이스라인 수준을 유지하고 OK/Apply 를 클릭하여 저장합니다.

피크 지정: 마우스를 피크의 시작점으로 이동하고, 왼쪽 버튼을 누른 채 피크의 낙하 지점으로 드래그하고, 왼쪽 버튼을 놓아 피크 영역을 정의하고, 피크 영역의 가장자리를 미세하게 조정하고, OK/Apply 저장을 클릭합니다.

dn/dc 값 입력 및 귀일화: dn/dc 값을 입력하고 normalise를 선택합니다(예: BSA, dextran과 같은 <50kDa 표준 샘플을 템플릿에 사용한 경우 이 시스템에서 귀일화된 경우 반복 작업이 필요하지 않음).

보고서 보기: 위의 단계를 완료하면 보고서를 보고 테스트 결과를 얻습니다.

계기 교정 (정기적으로 진행)

지연 볼륨 보정: 각 검출기 간 파이프라인 볼륨을 보정하여 피크 끝 위치가 정렬되도록 합니다. 일반적으로 설치 엔지니어가 완료하고 결과는 Astra 소프트웨어 템플릿에 저장됩니다.

90 ° 각도 신호 보정 (톨루엔 보정): 90 ° 각도의 산란광 강도 값과 전압 값의 보정 계수를 획득하여 매년 또는 반년에 한 번 권장합니다.

18 각도 귀일화 보정: 90 ° 각도를 기준으로 다른 17 개의 검출기를 보정하고 Rg<10nm의 표준품 (예: 30kDa의 우회전당무수 Dextran 또는 우혈청백단백 BSA) 을 사용하여 보정한다.