액상 크로마토그래프 형광 검출기(FLD)는 형광을 생성할 수 있는 화합물이나 파생화 후 빛을 내는 물질에 적합한 고감도·고선택성 검출기다.그 핵심우세는 민감도가 자외선검사기의 여러배에 달하고 교란방지능력이 강하다는것이다.
형광 검출기의 작동 메커니즘은 광학 발광 현상을 기반으로 하며 핵심 단계는 다음과 같습니다.
자극광은 광원 (상용 제논, 수은등 또는 레이저 다이오드) 을 비추어 특정 파장의 자극광을 발사하고, 단색기 (래스터 또는 필터) 를 통해 단일 파장의 자극 빔을 선별하여 크로마토그래피 기둥의 유출액 (검출 풀) 에 초점을 맞춘다.측정을 기다리는 분자가 자극광 에너지를 흡수하면 기본 상태 (안정 상태) 에서 자극 상태 (고에너지 상태) 로 약진한다.
형광발사가 격발상태에 있는 분자는 불안정하여 아주 짧은 시간내에 (10⁻⁸~10⁻*초) 비복사약진을 통해 부분적 에네르기를 손실하고 격발상태의 *저진동에너지급으로 돌아간후 다시 복사약진을 통해 광자를 방출하고 기본상태로 돌아갈수 있는데 이 과정에서 산생된 빛이 바로 형광이다.형광의 파장은 항상 자극 광파장 (스톡스 변위) 보다 크며, 이는 형광 검사의 핵심 특징이다.
신호 수집 및 변환은 빛을 자극하는 방해를 피하기 위해 검출기의 형광 수신 시스템 (광전 배율 증폭관 PMT 또는 광전 다이오드) 은 일반적으로 빛을 자극하는 광선과 90 ° 각도로 배치됩니다.발사된 형광은 단색기를 통해 특징적인 형광 파장을 선별한 후 광전 검출기에 의해 수신되어 전신호로 전환된다.전신호의 강도와 측정대기 성분의 농도는 일정한 범위내에서 선형관계를 보이고있으며 후에 확대와 데터처리를 거쳐 크로마토그래피봉과 정량결과를 얻는다.
테스트 프로세스:
제논 램프 또는 레이저와 같은 자극 광원은 연속 스펙트럼을 방출하고 단색기 분광 후 특정 파장을 자극 광원으로 선택합니다.
빛을 자극하여 샘플 풀의 형광 물질을 비추어 형광을 발생시킨다.
형광신호는 직각방향의 광로 (광간섭을 자극하지 않음) 를 통해 광민감소자 (예: 광전배증관) 에 의해 검측되고 전신호로 전환된다.
전기 신호는 확대된 후 데이터 처리 시스템으로 전송되어 크로마토그래프를 생성한다.
액상 크로마토그래프 형광 검출기는 높은 감도와 높은 선택성으로 흔적 분석의 중요한 도구가 되었으며, 특히 생물, 환경 등 분야에 적합하다.그러나 비범용성 및 간섭에 대한 민감성으로 인해 적용 범위가 제한됩니다.레이저 광원, 연용 기술 또는 파생화 방법을 결합함으로써 그 분석 능력을 한층 더 확장하고 복잡한 샘플 검측 수요를 만족시킬 수 있다.