초미량 핵산 정량 분석기 (예: 초미량 핵산 단백질 측정기) 의 단백질 테스트는 주로 자외선-가시 분광 광도법에 기초하여 특정 파장 (예: 280nm) 에서 단백질의 흡광도를 측정하여 그 농도를 추산한다.다음은 단백질을 테스트하는 구체적인 방법과 핵심 단계입니다.
1. 테스트 원리
단백질 분자 중의 트립토판 (Trp), 타이르 (Tyr) 잔기 및 Cys-Cys 이황 결합은 280nm 파장에서 현저하게 흡수된다.기기는 280nm에서 단백질 용액의 흡광도(A280)를 측정해 랑베르-빌의 법칙과 결합해 단백질 농도(mg/ml)를 직접 계산한다.이 방법은 표준 곡선을 구축할 필요가 없지만 280nm에서 강하게 흡수되는 다른 불순물 (예: 핵산, 페놀류 물질) 이 샘플에 포함되지 않도록 해야 합니다.
2. 조작 절차
계기 준비
전원을 연결하고 계측기를 가동하여 5-10분 동안 안정된 상태로 예열한다.
단백질 A280 검사 모드를 선택하고 광선을 설정합니다 (일반적으로 10mm이지만 기기가 자동으로 조정될 수 있습니다).
순도 높은 증류수 또는 빈 완충액을 사용하여 0점 교정을 수행하여 배경 간섭을 제거합니다.
샘플 처리
시료량: 2μL 시료(일부 기기는 0.5-2μL 미량 측정 지원)를 사용하여 안정적인 액체 기둥이 형성되도록 권장한다.
기포 방지: 샘플을 찍을 때 검측 구멍의 밑부분을 가볍게 터치하여 액체를 천천히 방출하여 기포가 흡광도 측정에 영향을 주지 않도록 방지한다.
표면장력: 시료의 표면장력이 낮을 경우(예를 들어 오염제거제 포함) 시료량을 4μL로 증가하여 액기둥의 안정성을 보장할 수 있다.
공백 대조
완충액과 같은 공백 용액 2 μL를 취하여 하단 베이스에 추가하고 상단 베이스를 내려놓고 "공백" 버튼을 클릭하여 배경 흡광도를 기록합니다.
기단을 닦아서 액체가 남아 있지 않도록 하세요.
샘플 검사
2μL의 측정 대기 샘플을 취하여 하단 받침대에 추가하고, 상단 받침대를 내려놓고"샘플"버튼을 클릭합니다.
기기는 자동으로 흡광도를 측정하고 농도를 계산하며, 결과는 보통mg/ml 단위로 나타난다.
고농도 시료: 흡광치가 기기의 양정 (예: 빛의 강도 <200) 을 초과하면 시료를 희석한 후 다시 검사해야 한다.
데이터 로깅 및 정리
체크 결과를 저장하고 CSV 또는 PDF 형식으로 내보냅니다.
먼지 없는 천으로 받침대를 닦아 교차 오염을 피하다.
3. 관건적인 주의사항
베이스라인 조정
기본 베이스라인 교정 파장은 340nm이며 필요에 따라 조정할 수 있습니다.
샘플 검사 전에 교정을 완료해야 합니다. 그렇지 않으면 스펙트럼 값이 오프셋되어 농도 계산 오류가 발생합니다.
샘플 순도
샘플에 280nm에서 간섭 흡수를 일으킬 수 있는 핵산, 페놀류 또는 고농도 염이온이 함유되어 있는 것을 피한다.
불순물 샘플을 검사하려면 BCA, Bradford 법과 같은 비색 방법을 결합하거나 이중 파장 (280nm/340nm) 을 사용하여 배경을 공제할 수 있습니다.
기기 유지 보수
광원: 장시간 노출을 피하고 사용하지 않을 경우 광원을 닫아 수명을 연장합니다.
단색기: 실리콘과 같은 건조제를 정기적으로 교체하여 색산 부품이 습기를 받아 곰팡이가 생기는 것을 방지한다.
검출기: 강한 빛의 직사 또는 습기에 의해 먼지가 쌓이는 것을 방지하고 청결을 유지합니다.
환경: 기기는 건조하고 안정된 작업대에 배치하고 에어컨 송풍구나 직사 햇빛을 멀리하며 온도는 25 ℃ ± 2 ℃ 로 제어해야 한다.
특수 샘플 처리
응축 시료: 45도 경사면 밀착 벽을 사용하여 천천히 로드하여 오버플로우 또는 뉴턴 루프의 간섭을 방지합니다.
다당류 물질: 검사 후 에탄올 시약으로 액로를 씻어 잔류를 피해야 한다.
유지 샘플: 상부 현상이 발생하면 먼저 저온 원심 분리 후 검사해야 한다.
4. 응용 장면과 장점
빠른 정량: 복잡한 사전 처리 없이 2-5분 이내에 테스트를 완료하여 높은 패스스루 필터링에 적합합니다.
미량 검사: 0.5-2 μL 샘플만 있으면 임상 표본, 희귀 단백질과 같은 희귀 샘플을 절약할 수 있습니다.
다중 매개변수 분석: 일부 기기는 A260 (핵산), A280 (단백질) 및 OD600 (세균 농도) 을 동시에 검사하여 다중 그룹 지정량을 구현할 수 있습니다.
휴대성: 현장 테스트 또는 모바일 랩을 위한 컴팩트한 설계