핵산 단백질 측정기는 분자생물학 실험실에서 핵산(DNA/RNA)과 단백질 농도를 빠르게 정량하는 데 사용되는 핵심 장비다.정확한 조작은 데이터의 정확성을 보장할 수 있을 뿐만 아니라 기기의 수명도 연장할 수 있다.이 글은 실험실의 초보자들을 위해 핵산단백질측정기의 기본조작규범, 흔히 볼수 있는 문제 및 실용기교를 소개하게 된다.
1. 작업 전 준비 작업
1.계기 교정
- 공백 교정: 매번 사용하기 전에 TE 완충액과 같은 초순수 또는 완충액을 사용하여 공백 교정을 수행하여 배경 간섭을 제거합니다.
- 정기적인 유지 관리: 장비가 오랫동안 사용되지 않으면 다시 조정하고 광원, 검출기가 정상인지 확인해야 합니다.
2. 샘플 준비
- 핵산 시료: 미세먼지나 불순물이 없는지 확인하고 필요시 원심분리(12000rpm, 1~2분)하여 불순물을 제거한다.
- 단백질 샘플: 흡광도 검사에 영향을 미치지 않도록 SDS와 같은 고농도 오염 제거제를 피합니다.
3. 적합한 검사 모드 선택
- NanoDrop과 같은 자외선 흡수법: DNA/RNA(260nm) 및 단백질(280nm)의 빠른 측정에 적용됩니다.
- 형광법(예: Qubit): 저농도 핵산 검사에 적합하며 민감도가 더 높습니다.
2. 표준 조작 절차
1. 전원 켜기 및 초기화
- 기기를 켜고 5-10분 예열합니다 (일부 장비는 더 오래 예열해야 함).
- 해당하는 검사 모드 (핵산/단백질) 를 선택합니다.
2. 샘플링 및 검사
1.청결 검측 플랫폼: 먼지 없는 종이에 소량의 초순수 또는 에탄올을 묻혀 검측 표면을 닦아 잔류 오염을 피한다.
2. 샘플링:
- NanoDrop 계측기: 1-2µL 샘플을 검사대에 떨어뜨려 검사팔을 내려놓는다.
- 비색 그릇형 기기: 비색 그릇의 청결을 확보하고 적당량의 샘플을 넣는다(보통 50-200µL).
3. 읽기: "Measure"를 클릭하여 데이터를 기록합니다.
4.청결: 검측을 마친 후, 즉시 초순수 또는 에탄올로 검측대를 청결하여 샘플 결정이 후속 검측에 영향을 미치는 것을 방지한다.
3. 데이터 기록 및 분석
- 핵산 순도 판단:
- DNA: A260/A280 1.8(순수 DNA), A260/A230>2.0(오염물질 없음).
-RNA: A260/A280 2.0(순수 RNA).
- 비정상적인 비율 (예: A260/A280<1.6) 은 단백질 또는 페놀 오염을 나타낼 수 있습니다.
- 단백질 측정: Bradford 또는 BCA 법을 사용할 경우 표준 곡선을 만들어야 합니다.
3. 일반적인 문제 및 솔루션
1. 검사 결과 예외(예: A260/A280 비율 낮음)
- 가능한 원인: 단백질이나 유기용매 오염.
- 솔루션: 샘플을 다시 순화하거나 Qubit과 같은 형광 정량법으로 변경합니다.
2.기기 오류 보고(예: "Sampletooconcentrated")
- 가능한 원인: 검체 농도가 검사 범위를 초과했습니다.
- 솔루션: 시료 희석 후 재검사.
3. 베이스라인 드리프트 또는 불안정
- 가능한 원인: 검측대 오염 또는 광원 노화.
- 솔루션: 검색대를 청소하거나 엔지니어에게 연락하여 라이트를 교정합니다.
4. 실용기교
1.기포의 간섭을 피한다: 샘플을 추가할 때 액체가 완전하고 기포가 없는지 확보한다. 그렇지 않으면 흡광도 파동을 초래할 수 있다.
2.저농도 시료 검사:
- 형광 법정량(예: Qubit)을 사용하여 자외선법보다 더 민감합니다.
- 자외선 방법을 사용해야 하는 경우 시료의 부피를 적당히 늘릴 수 있습니다(예: 2µL → 3µL).
3. 장기 스토리지 권장사항:
- 일주일에 한 번 이상 전원을 켜서 광학 부품의 습기를 방지합니다.
- 건조하고 먼지가 없는 환경에 보관합니다.