미생물 여과 검사는 시료 속 미생물을 물리적, 화학적 방법으로 풍부하게 모아 대상 균종을 분리·감정하는 과정이다.이 방법은 수질검사, 약품무균검사, 식품미생물오염분석 등 분야에 널리 응용된다.흔한 검사 대상은 세균(예를 들어 대장균, 황색포도상구균), 진균(예를 들어 곰팡이, 효모균) 등이다.정확한 분리와 감정은 검사 결과의 신뢰성을 확보하는 관건이다.
미생물 여과 및 분리 방법
2.1 샘플 전처리 및 여과
미생물 여과는 일반적으로 액체 샘플 (예: 물, 음료) 에 적용되는 멤브레인 필터 법 (MembraneFiltration, MF) 을 사용합니다.단계는 다음과 같습니다.
1.샘플 제조: 균질화 액체 또는 고체 샘플 (예: 식품은 균질 희석 필요).
2.여과: 0.22~0.45μm 공경의 여과막을 통해 미생물을 차단한다.
3. 전이: 필터를 선택적 또는 비선택적 배지에 부착하여 배양한다.
2.2 선택적 분리 기술
서로 다른 미생물은 특정 배양기와 배양 조건을 채택해야 한다:
박테리아
- 대장균: EMB(이홍미람한천) 또는 맥콘카이한천(MacConkeyAgar)을 사용한다.
- 황색포도상구균: 글루코올 고염진지(MSA)를 사용한다.
- 곰팡이:
- 곰팡이 및 효모균: 사포글리세린(SDA)을 사용하고 항생제를 첨가하여 세균의 성장을 억제한다.
미생물 감정 기술
3.1 형태학적 감정
- 균락 특성: 균락 형태 (크기, 색상, 가장자리, 표면 텍스처) 를 관찰합니다.
- 황색포도상구균이 황색이고 매끄럽게 돌출된 경우;곰팡이 균락은 솜털 모양이다.
- 현미경 관찰: 케일란 염색(G⁺/G⁻세균 구분), 아포 염색 등.
3.2 생화학 실험
대사 특성을 통해 균종을 감정:
- 산화효소시험: 가짜 단포균(양성)과 장균(음성)을 구분한다.
-IMViC 시험: 대장균을 감정합니다 (결과 패턴은 ++--).
- 설탕발효시험: 유당발효능력과 같이 대장균과 살모넬라균을 구분한다.
3.3 분자생물학적 방법
-16SrRNA 서열 분석: 세균 감정의"금 표준"으로 속 또는 종 수준까지 정확할 수 있다.
-PCR 기술: 대장균의 uida 유전자와 같은 특정 유전자에 대한 증폭 검사.
- MALDI-TOFMS: 단백질 지문 도표를 통해 미생물을 신속하게 감정한다.
애플리케이션 및 과제
4.1 실제 응용
- 수질측정: 수중 총대장균군과 발병균(예: 군단균)을 측정한다.
- 약품 무균 검사: 주사제, 생물제품에 미생물 오염이 없는지 확인한다.
- 식품안전: 식품에서 살모넬라균, 리스테리아균 등을 검출한다.
4.2 기술적 과제
1.저풍도 미생물 검사: 샘플 중 목표 균 함량이 낮을 때 풍부하게 배양해야 한다.
2.잡균 간섭: 복잡한 샘플 (예: 분뇨, 토양) 은 선택적 배양기를 최적화해야합니다.
3.빠른 감정 수요: 전통적인 방법은 시간이 걸리고 분자 생물학 기술을 보급해야합니다.