1. 사용 전: 사전 처리를 잘하여 원천에서 크로마토그래피 기둥을 보호한다

기둥의 활성화와 균형: 새로운 기둥 또는 1주 이상 방치된 크로마토그래피 기둥은 사용 전에 30-60분 (유속 1.0mL/min) 의 유동 균형을 사용하여 고정상이 충분히 침윤되도록 해야 한다;C18과 같은 반상 기둥은 20기둥의 부피를 메탄올/물(90:10)로 씻은 다음 샘플 흐름상으로 전환하여 고정상 건조로 인한 성능 저하를 방지할 수 있습니다.만약 기둥내의 보존용제와 류동이 서로 호환되지 않을 경우 (예를 들면 정상기둥은 정기탄으로 보존하고 류동상은 메탄올로 한다.) 과도용제를 사다리꼴로 씻어 용제가 서로 용해되여 기포가 생기거나 고정적으로 함몰되는것을 방지해야 한다.

시료와 유동상 정화: 시료는 반드시 0.22μm 여과막을 거쳐 여과하여 미세먼지, 부유물을 제거하고 기둥체판을 막지 않도록 해야 한다;고비점 불순물, 단백질, 유지가 함유된 시료는 미리 고상추출(SPE) 등의 방법으로 정화해 불순물이 고정상에 흡착되는 것을 방지해야 한다.흐름은 15-20분 동안 초음파 탈기가 필요하며 기포 (기포는 주압 파동, 봉형 이상을 초래할 수 있음) 를 제거한다.완충염 유동상을 사용할 때는 순도 높은 물 (예를 들어 초순수) 을 배합하여 여과 후 현재 배합하여 염류 결정이 크로마토그래피 기둥을 막지 않도록 해야 한다.

계기 상태 검사: 크로마토그래프 기둥을 설치하기 전에 샘플 안감을 청소하고 노화 방석을 교체하여 방석 부스러기, 샘플 잔류가 기둥 안으로 들어가지 않도록 한다;관로의 누출, 막힘 여부를 검사하여 기둥 앞의 압력이 안정되도록 확보한다;기둥 이음매가 잘 밀봉되어 있는지 확인하고, 일치하는 흑연 패드를 선택하여 배기가스가 누출되거나 압력이 고르지 않아 기둥이 손상되지 않도록 한다.

2. 사용 중: 규범화된 조작으로 기둥 손상을 피한다

온도 및 압력 제어: 크로마토그래피 기둥의 최고 사용 온도 (반상 기둥은 보통 ≤ 60 ℃, 정상 기둥 ≤ 80 ℃) 를 엄격히 준수하여 고온 가속 고정 상 유실을 피한다;기둥 압력은 출하 권장 범위 (일반적으로 ≤ 40MPa) 로 제어해야 하며, 압력이 갑자기 30% 이상 높아지면 즉시 정지 조사 (예: 여과 유동상, 세척 샘플 입구) 를 해야 하며, 압력이 너무 높아 고정상 압력, 기둥 침대가 무너지지 않도록 해야 한다.온도 상승 속도는 ≤ 10 ℃/min을 권장하며, 온도가 급상승하고 급강하하여 기둥 구조를 파괴하지 않도록 한다.

유동상 사용 규범: 강한 부식성 용제 (예: 농염산, 수산화나트륨) 의 사용을 피하고, 반상주 유동상 pH 범위는 2-8 (특수 내산 알칼리 기둥 제외) 로 통제해야 하며, 범위를 초과하면 실리콘 기질이 용해되고 고정된 상수해가 발생할 수 있다.경도 세척 시 유기적 비례 변화가 너무 빨라서는 안 된다 (예를 들어 분당 변화 ≤ 10%), 고정상의 급격한 수축이나 팽창을 피한다;완충염을 함유한 류동상을 사용한후 제때에 높은 비례의 물로 현상하여 염류결정을 방지해야 한다.

샘플링 작업 요구: 샘플링 양은 기둥 용량 (일반 C18 기둥 샘플링 ≤ 20 μL) 과 일치해야 하며, 과부하로 인해 피크 드래그, 고정 오염이 발생하지 않도록 해야 한다;샘플 입구의 온도 설정은 합리적이며, 샘플의 최고 비등점인 10-20 ℃ 보다 높지만, 기둥의 최고 사용 온도를 초과하지 않으며, 샘플의 분해로 불순물 오염 크로마토그래피 기둥이 발생하는 것을 방지한다.연속 샘플링 고농도, 고오염 샘플을 피하고, 샘플링 당 10-20 바늘 후 10-15 기둥 부피를 빈 흐름으로 씻는 것을 권장합니다.

3. 사용 후: 제때에 세척하여 기둥의 수명을 연장한다

일반 세척 절차: 실험이 끝난 후, 유동 사다리로 크로마토그래피 기둥을 씻어 잔류 샘플과 불순물을 제거합니다.반상주: 먼저 메탄올/물(50:50)로 20기둥의 부피를 씻은 다음 순수한 메탄올이나 아크릴로 30기둥의 부피를 씻어 강한 흡착성 불순물을 제거한다.정상주: 20기둥의 부피를 메탄/이소프로필알코올(90:10)로 씻은 다음 순수 메탄으로 보존한다.만약 시료에 단백질, 유지 등이 함유되어 불순물을 씻어내기 어렵다면 세척 공정에 5-10% 의 테트라하이드로푸란(THF)을 첨가하여 세척 효과를 강화할 수 있지만, THF의 일부 고정상 호환성에 주의해야 한다.

특수 오염 처리: 만약 기둥의 압력이 높아지고 봉형이 심하게 끌리면 기둥 내의 오염일 수 있으며 깊이 세척할 수 있다.반상주: 메탄올→메탄올/THF(80:20)→메탄올→아크릴의 순서로 계단식으로 씻어 단계당 20기둥 부피;정상주: 메탄→메탄/에틸에스테르(50:50)→메탄으로 씻는다.정상주를 강극성 용제 (예: 아세톤, 디클로로메탄) 로 씻어 고정상이 유실되지 않도록 하는 것을 금지한다.

보존방법: 단기보존(1개월내): 반상주는 순수메탄올 또는 아크릴로 밀봉보존하고 정상주는 정기탄으로 보존하여 기둥내에 기포가 없는것을 확보한다.장기보존(1개월 초과): 반상주는 메탄올/물(90:10)로, 정상주는 메탄/이소프로필알코올(95:5)로 보존하여 고정상건조노화를 방지한다.보관할 때는 크로마토그래피 기둥 양쪽 끝을 막대로 밀봉하고 서늘하고 건조한 곳 (온도 5~30 ℃) 에 놓아 햇빛이 직사하지 않도록 해야 한다.

이상의 규범적인 유지보수를 통해 고효률액상크로마토그래피기둥의 사용수명은 1000~2000회의 분석으로 연장될수 있으며 동시에 검측데터의 정확성과 중복성을 보장하고 사용원가를 낮출수 있다.부동한 류형의 크로마토그래피기둥 (예를 들면 이온교환기둥, 수성기둥) 의 유지보수방법은 공장설명서와 결부하여 조정해야 하며 류동상호환성과 고정상특성에 중점을 두어야 한다.