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세포는 세포 외 환경에서 서로 다른 유형의 막원성 낭포를 방출한다.이들 막원성 낭포는 포외낭포 (EV) 로 불리며 외비체와 미포체를 포함한다.외비체는 상대적으로 작은 포외낭포(30-150nm)로 세포간에 핵산, 단백질, 효소와 지질 등 생물대분자를 전이시킬수 있으며 세포간의 통신의 중요한 모식이다.또한 다양한 질병의 생물학적 표지물로 사용될 수 있으며 차세대 치료제의 천연 약물 배달 운반체 시스템으로도 사용될 수 있습니다.
본고에서 우리는 고속과 과속 원심분리기를 결합하여 지방원성 줄기세포에서 외비체를 신속하고 간단하게 분리하는 방법을 묘사하였다.세포는 BioBLU에 있습니다.® 0.3c 일회용 생체 반응 탱크에서 배양되고 DASbox®미니 생체 반응기 시스템 제어.DASbox 미니 바이오리액터 시스템은 대량의 줄기세포를 배양하여 높은 생산량의 외비체를 얻을 수 있다.그런 다음 CR22N 원심분리기를 사용하여 조건 배양기를 제거했습니다.이것은 고속 원심분리기이며 RCF는 32300xg에 달한다.이 문서에서는 10 x 50 mL 및 10 x 15 mL 테이퍼 하단관을 동시에 수용할 수 있는 R15A 고정 각도 회전을 사용합니다.외비체를 더욱 농축하기 위해 우리는 최대 RCF가 803000xg인 CP100NX 과속 원심분리기와 6x40mL의 원심분리관을 수용할 수 있는 P32ST 수평 회전자를 사용했다.또한 사탕수수매트액을 사용하지 않는 대조군보다 과속 원심분리 단계에서 사탕수수매트액을 사용함으로써 깨끗하고 균일한 외비체를 빠르게 분리할 수 있다.전체 원심분리 과정에서 대용량 로터를 사용함으로써 중복되는 원심분리 단계를 줄이고 외비체 분리 시간을 침전이나 여과 등 다른 분리 방법보다 빠른 4시간 이내로 단축했다.