폴리펩티드 분해기의 조작 사용은 설비 교정과 준비, 시약과 샘플 처리, 분해 반응 집행, 산물 순화 및 설비 유지 보수의 5대 핵심 부분을 포함한다.폴리펩티드 분해기구체적인 절차와 주의사항은 다음과 같다.
1. 설비 교정과 준비
부품 무결성 검사
전원을 켜기 전에 전원 코드, 반응기, 펌프, 밸브 등의 부품이 온전한지 검사하여 파손되거나 느슨해지지 않도록 한다.예를 들어, 반응기 씰이 노후화된 것을 발견하면 분해 과정에서 가스가 누출되지 않도록 즉시 교체해야 한다.
용제 저장병이 가스관과 긴밀하게 연결되어 누출이 없음을 확인하다.압축 공기 (AIR) 압력이 60-100psi이고 질소 가스 (N2) 압력이 5-10psi인지 확인합니다.
매개변수 교정
실험 수요에 따라 분해 온도, 압력, 유속 등 파라미터를 미리 설정한다.예를 들어, 효소가 분해 될 때 온도는 37 ℃ 로 정확하게 제어해야하며 파동 범위는 ± 0.5 ℃ 를 초과하지 않습니다.
정기적으로 온도 센서 (반년에 한 번, 오차는 ± 0.2 ℃ 이내로 제어해야 함) 와 압력 센서 (매년 한 번) 를 교정하여 데이터 정확성을 확보한다.
장치 예열
합성기 전원을 켜고 장치를 설정 반응 온도로 예열합니다.예열 시간은 장비 모델과 온도에 따라 다르므로 기다려야 합니다.
2. 시약과 샘플 처리
시약 준비
분해액(예: TFA/물/트리이소프로필실리콘=95:2.5:2.5), 활성화 시약(예: HBTU, DCC), 용제(DMF, DCM) 등을 준비하여 모든 재료가 신선하고 깨끗하며 불순물이 유입되지 않도록 한다.
시약이 침전 또는 변질되지 않았음을 확인하고, 사용 전에 시약을 여과하고, 개봉 날짜를 표시하며, 기한이 지난 시약은 즉시 폐기하는 것을 건의한다.
샘플 사전 처리
고점도나 미세먼지가 포함된 시료는 원심, 여과 등 예처리를 해 분해강을 막거나 펌프체를 손상시키는 것을 방지한다.예를 들어, 미리 처리되지 않은 샘플은 펌프의 마모율을 40% 증가시킬 수 있습니다.
3. 분해반응 집행
수지와 아미노산 고정
링크 아미드 레신 (Rink Amide Resin) 과 같은 적합한 고상 캐리어를 선택하고 디클로로메탄 (DCM) 으로 수지를 녹여 불순물을 제거한 후 뽑아 준비합니다.
목표 아미노산을 활성화 시약과 혼합해 활성 에스테르를 형성한 뒤 반응기를 투입해 보호가 벗겨진 아미노기와 결합해 펩타이드 키를 형성한다.
분해반응
TFA 혼합액과 같이 미리 차가운 분해액을 넣고 실온에서 2시간 동안 섞는다.분해 과정 중 온도, 압력 등 파라미터를 실시간으로 모니터링하여 이상을 발견하면 즉시 정지하여 검사해야 한다.
분해가 끝나면 반응액을 방출해 여과해 수지를 제거하고 TFA 등 용매로 수지를 3회 세탁해 여과액을 합친다.
4. 산물 순화
농축과 침전
분해액을 회전증발기로 옮겨 실온에서 작은 부피로 농축하고 메틸아세틸에테르(MTBE)를 넣어 폴리펩타이드를 석출한다.
원심(10000rpm·10분)을 통해 침전을 수집하고 콜드 에테르로 3회 세척해 굵은 펩타이드를 건조한다.
고효율 액상 크로마토그래프(HPLC) 순화
C18 반상주를 사용하여 순화하면 유동상 A는 0.1% TFA/물, 유동상 B는 0.1% TFA/아크릴이다.그라데이션 세척 조건 (0-30분 동안 B상이 10%에서 60%로 상승) 에서 목표 봉을 수집한다.
HPLC를 순화하면 폴리펩타이드 순도가 85%에서 98%로 향상됩니다.
5. 설비 유지보수와 정비
일상적인 청결
매번 사용 후 반응기 내벽을 이온제거수로 씻어 잔류 분해액과 단백질 파편을 제거한다.완고한 얼룩은 효소 함유 세제를 사용하여 물에 담근 후 솔로 씻을 수 있다.
매주 에탄올 75% 또는 차아염소산나트륨 용액 0.1% 로 파이프를 순환 소독하여 미생물이 자생하는 것을 방지한다.소독 후에는 질소로 파이프를 말려야 한다.
손상되기 쉬운 부품 교체
3개월마다 씰링의 탄성을 검사하고 경화나 균열이 생기면 즉시 교체해야 한다.1~2개월마다 흡기 필터를 교체해 먼지가 설비 내부로 들어가지 않도록 한다.
펌프체, 밸브 등 운동 부품에 분기마다 전용 윤활유(예를 들어 실리콘 기반 윤활지)를 주입하여 마찰 마모를 줄인다.
장기 보관 관리
설비를 사용하지 않을 때는 건조하고 통풍이 잘 되며 빛을 피하는 곳에 보관하여 해빛이 직사하고 습한 환경을 피면해야 한다.설비가 부식성 기체와 액체에서 멀리 떨어지도록 확보하다.
장비 금속 표면에 녹 방지 오일 (예: 바셀린) 을 바르고 먼지 방지 덮개를 덮습니다.