다채널 국산 단백질 흔적기 (WesternBlotting 기기) 의 기술 원리와 조작 절차는 주로 효율적이고 정확한 단백질 검사 능력에 의존한다.단백질 자국(WesternBlot)은 특정 단백질의 발현을 탐지하고 분석하는 실험 기술로 분자생물학, 의학 연구 등에 널리 활용된다.
다음은 다채널 국산 단백질 흔적기의 기술 원리와 조작 절차이다.
기술 원리
단백질 자국의 기본 원리는 젤 전영을 통해 시료의 단백질을 분자량 크기에 따라 분리하고, 분리된 단백질을 필름으로 옮기는 것이다.그리고 막에서 특정 항체와의 결합을 통해 단백질의 존재와 표현량을 측정한다.
다채널 단백질 흔적기는 주로 한 대의 기기에서 여러 샘플 통로의 병행 처리를 실현함으로써 실험 효율을 높인다.핵심 기술 원리는 다음과 같습니다.
단백질 분리:
겔전영 (SDS-PAGE): 샘플의 단백질은 폴리아크릴아미드 겔전영을 통해 분리되며, 분자량이 적은 단백질은 전장에서 빠르게 이동하고, 큰 단백질은 느리게 이동하여 크기에 따라 분리된다.
단백질 전이:
회전막: 전기전이(전영방식)를 통해 분리된 단백질을 겔에서 막(일반적으로 폴리플루오로에틸렌 PVDF 막 또는 질산섬유소 막)으로 옮긴다.막의 단백질은 특정 위치에 고정됩니다.
단백질 검사:
항체 부화: 특이성 항체 (일반적으로 대상 단백질에 대한 항체) 를 사용하여 항체와 막의 대상 단백질이 결합됩니다.
화학발광 또는 발색반응: 효소로 표시된 2급항체는 목표단백질과 결합되고 화학발광반응 또는 발색반응을 통해 신호를 산생하며 영상시스템을 통해 단백질의 존재와 표현량을 검측한다.
다중 채널 기술:
다중 채널 단백질 자국계는 전통적인 단일 채널 단백질 자국을 바탕으로 동일한 실험 과정에서 여러 샘플 채널을 동시에 처리 할 수 있습니다.이는 여러 개의 샘플 구멍과 병렬 조작을 통해 실험의 효율과 데이터의 비교가능성을 향상시켰다.
운영 프로세스
다중 채널 국산 단백질 인쇄기의 운영 프로세스에는 일반적으로 다음과 같은 몇 가지 주요 단계가 포함됩니다.
1. 샘플 제조
검사할 세포나 조직 샘플을 채취하다.
분해 완충액을 사용하여 세포를 분쇄하고 단백질을 추출한다.
추출한 단백질을 정량하여 각 샘플에 같은 단백질량을 첨가하도록 확보한다.
2. SDS-PAGE 전기 수영
폴리아크릴아미드 젤을 준비하고, 보통 SDS-PAGE 젤을 사용하며, SDS(12알킬황산나트륨)는 단백질의 구조를 파괴해 음전하를 띠게 하고 분자량 크기로 분리하는 데 쓰인다.
시료를 겔에 싣고 전장에서 전기수영을 하며 분자량에 따라 단백질을 분리한다.
3. 회전막
젤의 단백질을 PVDF 막이나 질산 섬유소 막으로 옮깁니다.전막 과정은 통상 전기전이를 통해 실현된다.
다채널 단백질 흔적기의 필름 변환 유닛과 같은 필름 변환 기기를 사용하여 전류, 전압, 전이 시간 등의 매개변수를 조정하여 단백질이 효율적이고 균일하게 필름으로 전이되도록 합니다.
4. 차단
5% 탈지분유 또는 BSA 용액과 같은 폐쇄액 처리 필름을 사용하여 비특이성 결합 위치를 폐쇄하고 항체가 필름의 다른 부분과 결합하는 것을 방지합니다.
5. 항체 부화
1항부화: 1항용액에 막을 넣는데 일반적으로 목표단백질에 대한 특이성초급항체이다.부화시간은 항체의 특성에 따라 1시간에서 밤을 지낼 수 있다.
2항 부화: 효소 (예를 들어 매운 뿌리 과산화물 효소 HRP) 또는 다른 검출 가능한 분자를 표시한 2급 항체로 부화하여 신호를 강화한다.
6. 화학 발광 검사
화학 발광 베이스 (예: ECL 시약) 를 사용하여 반응하면 HRP 효소는 베이스 발광을 촉진합니다.
화학 발광 영상 시스템과 같은 이미징 시스템을 사용하여 발광 신호를 포착하고 단백질 검사 이미지를 생성합니다.
다중 채널 단백질 인쇄기의 다중 채널 설계는 동시에 여러 샘플에 대한 신호 포착을 허용하여 효율성을 향상시킵니다.
7. 데이터 분석
검출된 스트라이프의 밝기와 크기에 따라 단백질의 발현 수준을 분석한다.스트라이프의 강도는 목표 단백질의 표현량과 정비례한다.
소프트웨어를 사용하여 스트라이프의 정량 분석을 하고 표준 단백질 눈금자와 비교하여 단백질의 상대 표현량을 추산합니다.
이점 및 특징
다중 채널 병렬 작업: 여러 샘플을 동시에 처리하여 생산성과 데이터 비교 가능성을 높일 수 있습니다.
자동화정도가 높다: 계기를 통해 자동적으로 전막, 항체부화, 세척 등 절차를 통제하여 인위적인 오차를 줄인다.
고감도 및 고통량: 저풍도 단백질 검사에 적합하며 대량의 샘플을 처리할 수 있습니다.
적용 범위가 넓다: 단백질 표현량 분석, 항체 특이성 검증, 단백질-단백질 상호작용 연구 등 다양한 실험에 응용할 수 있다.
결론
다채널 국산 단백질 흔적기는 효율적이고 자동화된 조작 과정을 통해 단백질 흔적 실험의 효율과 정밀도를 크게 향상시켰다.이는 과학연구일군들에게 더욱 높은 통량과 더욱 빠른 단백질검사도구를 제공하였는데 특히 여러 견본을 동시에 처리해야 할 때 뚜렷한 우세를 보여주었다.