정류분광기는 신속반응동력학을 연구하는 분석기술로서 그 핵심은 반응물의 쾌속혼합과 순간정지류동을 실현하고 광학신호를 통해 실시간으로 반응진척을 감시하는데 있다.다음은 작업 원리와 사용 세부 사항에 대한 상세한 설명입니다.

1. 작업원리

1.급속 혼합 시스템: 정류 분광기의 혼합 유닛은 일반적으로 두 개의 주사기 또는 공기압 장치로 구동되며, 시약 A와 B와 같은 두 가지 반응물을 노즐이나 혼합실을 통해 고속으로 혼합한다.혼합 시간은 0.5ms로 짧아 균일한 조건에서 반응이 시작되도록 할 수 있습니다.

2.광학 검사 시스템: 혼합 된 용액이 관찰 풀로 유입되고, 광학 시스템은 광원 (가시적 또는 자외선), 단색기 (특정 파장 선택) 및 탐측기 (예: 광전 다이오드 또는 CCD) 를 통해 실시간으로 흡광도, 형광 또는 산란 신호의 변화를 기록합니다.시간 해상도는 마이크로초급(10μs-10ms)으로 순간적 중간체나 신속반응동력학을 포착할 수 있다.

3.시간 분별 제어: 트리거를 통해 혼합과 광학 검측을 동기화하고, 반응이 흐름을 멈춘 후, 시간에 따른 신호의 변화 곡선을 연속적으로 기록하여 반응 속도 상수, 활성화 에너지 등 동력학 파라미터를 유도한다.

2. 사용세부사항

1. 시료 준비: 반응물은 미리 적당한 완충액에 조제하고 0.22μm 여과막을 통해 여과하여 과립이 노즐을 막지 않도록 해야 한다.단백질이나 효소류 샘플의 경우 활성을 유지하기 위해 4 ℃ 로 예냉해야 한다.

2. 매개변수 설정

- 유속 및 혼합 비율: 반응 속도에 따라 주사기 주입 속도(예: 18.5 μL/ms)를 조정하여 균일한 혼합을 보장합니다.

- 파장 선택: 단색기를 통해 특징 파장(예를 들어 단백질 흡수봉 280nm)을 설정하고 최소 단계는 0.1nm에 달한다.

- 시간 창: 중요한 중간체 신호를 놓치지 않도록 반응 시간에 따라 검사 주기 (예: 밀리초에서 초 단위) 를 설정합니다.

3.데이터 수집: 혼합을 트리거한 후, 시스템은 자동으로 흡광도 또는 형광 강도의 시간에 따른 변화 곡선을 기록합니다.신호 잡음비를 높이고 완충액 베이스라인과 같은 공백 대조를 제거하기 위해 여러 차례 반복 실험 (일반적으로 ≥ 3회) 이 필요합니다.

4. 기기 유지 보수

- 세척 절차: 실험 후 즉시 이온제거수로 파이프를 씻은 후 저농도 질산 또는 수산화나트륨 용액으로 잔류 단백질이나 미네랄 침전을 제거한다.

- 정기적인 보정: 광원 강도, 탐지기 감도 및 혼합 시간 일관성을 확인하며, 특히 장시간 사용 후 시간 지연을 재지정해야 합니다.

- 샘플 풀 관리: 관찰 풀 (예: 20μL 용적) 은 기포나 스크래치가 광로에 영향을 주지 않도록 청결을 유지해야 한다.

5. 주의사항

- 혼합 균일성: 복잡한 시료는 미리 압력을 증가시키거나 소용돌이 혼합실을 사용하여 확산 경도를 줄일 수 있습니다.]

- 사체적 제어: 파이프라인 설계는 잔류 부피(일반적으로 <10μL)를 최소화하여 교차 오염을 방지해야 합니다.

- 온도 영향: 온도 제어 시스템은 반응 탱크의 온도를 일정하게 유지해야 합니다 (예: ± 0.1 ℃). 열파동이 반응 속도를 방해하지 않도록 해야 합니다.