하나,전자동 폴리펩티드 합성기장치 조정 및 준비
설치 및 디버그
전문 기술자가 장비의 설치 및 디버깅을 수행하여 장비가 올바르게 작동하도록 합니다.
용제 저장병과 가스관이 잘 연결되어 있는지, 기기의 각 부분이 잘 되어 있는지 검사한다.
합성기 전원 스위치 및 압축 공기 스위치를 켜고 압력이 범위 (예: "AIR" 테이블의 압력이 60psi보다 크고 100psi 미만인지 확인합니다.N2 테이블의 압력은 5psi보다 크고 10psi보다 작습니다.)
교정 및 테스트
제조업체의 설명서에 따라 설비의 교정과 테스트를 진행하여 모든 시스템 (예: 펌프, 밸브, 검측기 등) 이 정상적으로 작동하도록 확보한다.
온도, 바코드, 반응기 혼합 교반, 취액침, 아미노산 트렁크 테스트를 진행한다.솔레노이드 밸브 테스트;화학 시약병과 아미노산병의 유량 교정;UV 제어 교정.
적합한 반응 용기를 선택하다
합성 규모에 따라 적합한 반응 용기를 선택하고 용기의 재료가 반응물이나 용제와 반응하지 않도록 한다.
2. 시약과 재료 준비
시약 준비
합성용 아미노산, 활성화 시약, 용제 등을 준비해 불순물이 유입되지 않도록 모든 재료가 신선하고 정제되도록 한다.
합성 방안에 따라 필요한 물질의 비율에 따라 측정하여 정확성을 확보한다.
각 라벨이 부착된 액체 저장병에 시약을 순서대로 넣는다.
수지 준비
수지를 고상합성기에 넣고 적당한 용제(예를 들어 DCM)로 수지를 용해하여 말린다.
DMF와 같은 용매제를 사용하여 수지를 씻어 불순물을 제거하고 세탁이 끝나면 말려서 준비한다.
3. 합성 작업
반응 조건 설정
필요한 폴리펩타이드의 서열과 길이에 따라 온도, 압력, 시간 등을 포함한 적합한 반응 조건을 설정한다.
보호되지 않음
이전 아미노산의 보호 기단을 제거하여 다음 아미노산과 반응할 수 있도록 한다.
예를 들어, 트리플루오로에틸산/디클로로메탄 용액의 40% 를 사용하여 보호를 벗은 후 디클로로메탄, 메탄올 등으로 세탁한다.
짝짓기
새로운 아미노산과 보호되지 않은 아미노산을 결합하여 펩타이드 결합을 형성한다.
첫 번째 아미노산(보통 C단부터 시작)을 일정 부피의 DMF로 녹이고 DCC, HBTU 등과 같은 축합제를 넣어 활성화한다.
활성화된 아미노산 용액을 고상합성기에 투입해 적정 반응 농도까지 DMF를 보충하고 섞어 축합 반응을 한다.
세탁
반응하지 않은 물질과 부산물을 깨끗이 씻어내고 반응의 순도를 확보한다.
각 단계의 합성이 완료될 때마다 세척을 통해 반응으로 발생하는 부산물과 반응하지 않는 원료를 제거하여 불순물의 축적을 줄여야 한다.
반복 단계
폴리펩티드 체인이 예정된 길이에 도달할 때까지 보호 해제 및 짝짓기 단계를 반복합니다.
4. 산물 절단과 정제
수지 분해
분해액(일반적으로 TFA와 같은 강산을 포함함)을 구성하고 전면 냉동고에 올려 냉장 보관한다.
펩타이드 수지를 반응솥에 넣고 미리 차가운 분해액을 넣고 반응을 저어 폴리펩타이드를 수지에서 분해시킨다.
분해가 끝나면 반응액을 방출하고 여과해 수지를 제거하고 TFA 등 용매로 세탁한다.
폴리펩티드 순화
분해액을 회전증발기로 옮겨 실온에서 작은 부피로 농축하다.
적당한 침전제(예를 들어 메틸아세틸에테르)를 사용하여 폴리펩타이드를 석출하고 원심, 세척 등의 절차를 통해 굵은 펩타이드를 얻는다.
고효율 액상 크로마토그래프(HPLC)와 같은 방법으로 굵은 펩타이드를 순화해 불순물을 제거하고 대상 폴리펩타이드를 분리한다.
농축, 여과 및 동결건조
순화된 폴리펩타이드 용액을 선증하여 유기용제를 제거하고 농축된 폴리펩타이드 용액을 얻는다.
농축된 폴리펩티드 용액을 무균으로 여과하다.
여과된 폴리펩티드 용액을 동결건조기에 넣고 적당한 온도 상승 절차를 설정하여 동결 처리한다.
5. 품질 제어와 기록
반응 프로세스 모니터링
적절한 검사 방법 (예: 자외선 검사, 질량 스펙트럼 분석 등) 을 사용하여 반응 과정을 모니터링하여 각 단계의 반응이 예상대로 진행되도록 합니다.
기록 및 보고
시약 사용량, 반응 시간, 온도, 압력 등 각 단계의 조작 매개변수와 결과를 상세히 기록한다.
실험 보고서를 생성하고 합성 과정 중의 핵심 데이터와 산물 순도 등 정보를 총결한다.